苯磺隆对斑马鱼胚胎孵化的影响

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1、20l4年2月渭南师范学院学报Feb．2014第29卷第3期JournalofWeinanNormalUniversityVo1．29No．3【蓓蕾园地】苯磺隆对斑马鱼胚胎孵化的影响李争龙(渭南师范学院化学与生命科学学院，陕西渭南714099)摘要：实验1：2_-组不同浓度(80mg／L、120mg／L和160mg／L)的苯磺隆溶液处理斑马鱼胚胎，研究苯磺隆对斑马鱼胚胎孵化情况的影响．研究发现，随着苯磺隆溶液浓度升高，斑马鱼胚胎的孵化率逐渐降低，而且胚胎发育过程随之变缓．关键词：苯磺隆；斑马鱼胚胎；孵化率；孵化进程中图分类号：$859．83文献标志码：A文章编号：1009

2、—5128(2014)03—0089-03收稿日期：2013—09—16基金项目：国家级大学生创新创业计划项目：斑马鱼母体免疫对子代抗感染力的影响(201210723004)；渭南师范学院大学生创新创业计划项目：斑马鱼母体免疫对母源性溶菌酶传递和功能的影响(12XK065)作者简介：李争龙(1989一)，男，陕西商洛人，渭南师范学院化学与生命科学学院2010级生物科学专业本科生．苯磺隆是由美国杜邦公司研究开发的内吸传导型磺酰脲类除草剂，在国内外广泛使用．其分子式为C，H．，N0S，分子量为385．39，化学名为2一[N一(4一甲氧基一6一甲基一1，3，5一三嗪一2一基)一

3、N一甲基氨基甲酰胺基磺酰基1苯甲酸甲酯．目前，苯磺隆是我国使用最广泛的磺酰脲类除草剂品种之一，主要用于麦田中防止阔叶杂草的生长]，其效果良好，用量低．但苯磺隆的降解速度较为缓慢，随着苯磺隆的广泛使用，势必会对环境造成一定污染，危害生物健康．斑马鱼原产于印度．是一种淡水观赏鱼。属鲤科．由于斑马鱼的基因与人类基因有87％的相似，且成本低，易获取。孵出3个月后便可达到性成熟，其产卵并不局限于某个特定的时期，对水质要求不高，因此被广泛应用于环境毒理学研究[2]．另外，性成熟的斑马鱼成鱼每隔几天便可产卵一次，其产出的胚胎容易收集。发育迅速，对实验的敏感度高于成鱼，而且胚胎胎体透明便

4、于观察_5]，因此斑马鱼胚胎毒性实验已经成为传统成鱼急性毒性试验的替代手段，是生态毒理学研究的一种重要的方法_6J．本实验以斑马鱼胚胎为实验对象，研究苯磺隆对斑马鱼胚胎孵化情况的影响，进而探讨苯磺隆的生物学毒性．1实验材料和方法1．1试剂苯磺隆，购自淄博新农基农药化工有限公司．1．2斑马鱼饲养及胚胎收集成年斑马鱼购自渭南市虫鱼市场，运回实验室后，将斑马鱼饲养于大玻璃箱内，雌雄鱼分开饲养．在实验室玻璃缸内，连续充气，光周期为自然光周期，利用恒温棒保持缸内水温在26~C左右，每日喂食2次，上午9：00和下午5：00分别喂适量线虫．每天第一次喂食后约1h换水1／3，每周清洗一次

5、鱼缸．由于斑马鱼凌晨产卵，在实验前一天晚上按照2：1的比例将雌雄鱼放人同一玻璃缸内，在缸底放一层纱布，以防成鱼吃掉鱼卵．用多层黑色塑料袋将鱼缸套住，避免光线照射．第二天早上取下黑色塑料袋，等0．5～1h，雌雄鱼交配完成后，将纱布取出，用吸管收集受精卵，并用蒸馏水快速并小心清洗胚胎，去除胚胎上的异物以及死卵，洗净的鱼卵用于本次暴露试验[7]．1．3溶液配制称取1g苯磺隆，放入1L蒸馏水中，充分搅拌至完全溶解，配制成浓度为1g／L的苯磺隆储存液．▲90▲李争龙：苯磺隆对斑马鱼胚胎孵化的影响第29卷实验前用蒸馏水稀释至80mg／L、120mg／L、160mg／L的使用液．1．4

6、毒性试验~实验前取80mL三种浓度的苯磺隆溶液分别放入200mL烧杯中，并置于26C水浴中，保持溶液温度．对照组以等体积蒸馏水代替苯磺隆溶液．恒定．每组设两个平行～将洗净的胚胎随机分组，每组50颗．胚胎产出2．53h后为囊胚期初期些胚胎按组随机放人，将这不同浓度的溶液中一．每隔24h更换次溶液，以保持溶液浓度不变，每次更换溶液之前，记录胚胎孵化出鱼苗的个数，连续观察6d．在暴露实验过程中．及时去除死卵，以防止影响周围的其他胚胎．1．5数据分析结果取两组平行实验的平均值．胚胎孵化率计算公式如下：f8]斑马鱼胚胎孵化率=喜装篙蓑戛淼x100％．2实验结果2．1斑马鱼胚胎在苯磺

7、隆溶液中的孵化情况以不同浓度苯磺隆溶液处理斑马鱼胚胎后。其孵化情况见表1所示表1不同浓度苯磺隆溶液中斑马鱼胚胎的孵化情况2．2苯磺隆对斑马鱼胚胎孵化率的影响从图1可以看出，苯磺隆处理可以显著降低斑马鱼胚胎的孵化率，而且随着浓度升高，胚胎孵化率逐步降低．对照组、80mg／L、120mg／L和160mg／L处理组的胚胎孵化率分别为45％、25％、22％和14％．兰40讣薹30詈20剐田10槎苯磺隆浓度(mg／L)图l苯磺隆处理对斑马鱼胚胎孵化率的影响一最早孵化时间■集中孵化时间■孵化完毕时间080j20160笨磺隆浓度(mg／L)