莪术醇对斑马鱼胚胎发育的影响

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1、莪术醇对斑马鱼胚胎发育的影响：田丽莉，董建勇，黄长江【摘要】目的：研究莪术醇对斑马鱼胚胎发育的影响。方法：以孵育6h的斑马鱼胚胎为实验模型，设空白对照组和莪术醇组，观察记录发育畸形、孵化率、心率、自主运动次数及仔鱼的泳速。结果：莪术醇可致斑马鱼身体弯曲，EC50(96h)为51.17mg·L-1;能明显降低胚胎孵化率(P<0.05);使心率显著降低(P<0.05)，且呈剂量依赖性。低浓度莪术醇可显著促进斑马鱼自主运动(P<0.01);能明显减小仔鱼的泳速(P<0.05)。结论：

2、莪术醇对斑马鱼胚胎的发育有一定影响。【关键词】莪术醇;斑马鱼胚胎;畸形;孵化率;心率;自主运动;泳速　　Abstract:Objective:TostudythedevelopmentaleffectsofCurcumolonembryo-larvalzebrafish.　　Methods:The6hpost-fertilizationzebrafishlydividedintocontrolgroupanddifferent　　concentrationoftheCurcumolgroupsbase

3、donconcreteexperiment，thennon-lethalmalformation，hatchingrate，heartbeat，spontaneousmovementandsmingvelocityalityofzebrafishg·L-1forcurvedbodyaxis;Curcumolmadehatchingrateloolcouldstimulatespontane-ousmovement(P<0.01)andreducethesmingvelocityparedtoth

4、econtrolgroup.Conclusion:Curcumolisdevelopmentallytoxiceffectonzebrafishinearlylifestage.　　Keyol;zebrafish;malformation;hatchingrate;heartbeat;spontaneous　　movement;smingvelocity　　莪术醇是莪术油主要有效成分之一[1]。《中国药典》(2005年版)规定莪术醇为临床抗病毒、抗肿瘤用药莪术油质量控制的指标成分。莪术醇在体外能抑制金

5、黄色葡萄球菌、β溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌的生长[2];对呼吸道合胞病毒有直接抑制作用，对流感病毒A和A3型有直接灭活作用[3-4]。莪术醇也是一种有发展前途的抗肿瘤药物[5]，可通过与半胱天冬蛋白酶无关的线粒体途径诱导人肺腺瘤(ASTC-a-1)细胞凋亡[6]。但莪术醇毒理学的研　　究鲜见系统文献报道。近年来，斑马鱼生物模式愈多地应用于药物毒性评价[7]。本实验以斑马鱼胚胎为模型，研究莪术醇对斑马鱼胚胎的发育毒性，为临床安全用药提供初步研究资料。　　1材料和方法　　1.1动物　　无病原体AB品

6、系斑马鱼，由温州医学院水域科学与环境生态研究所提供。斑马鱼饲养于全封闭循环系统，养殖和繁殖均参照ZebrafishBook标准，鱼房内光照/黑暗比为14/10，室内温度26℃，水温28℃，pH6.8～7.5，电导率850～900，其各项水质指标均合要求。取健康性成熟的斑马鱼，雌雄交配繁殖获得受精卵。将受精卵收集清洗后移入培养皿，在光照/黑暗比为14/10、28℃的人工气候箱内孵育至6h。　　1.2试药与仪器　　莪术醇由本实验室从莪术油中分离得到，经气相色谱鉴定纯度为99.2%;二甲基亚砜(分析纯、批号

7、0902106、上海展云化工有限公司);Rxz智能型人工气候箱(宁波市科技园区新江南仪器有限公司);NikonEelipsete2000倒置显微镜(日本尼康公司);PB0105J运动测试仪(法国Vieol·L-1NaCl、5.4mmol·L-1KCl、0.25mmol·L-1Na2HPO4、0.44mmol·L-1K2HPO4、1.3mmol·L-1CaCl2、1.0mmol·L-1MgSO4、4.2mmol·L-1NaHCO3;莪术醇用DMSO助溶配制母液，实验前用斑马鱼胚胎培养液稀释获得工作液，D

8、MSO终浓度小于0.1%[8]。根据预实验设空白对照组(胚胎培养液)和不同浓度试药组。　　1.3.2斑马鱼胚胎畸形和孵化率测定：设空白对照组和莪术醇试药组(2mg·L-1、10mg·L-1、20mg·L-1、40mg·L-1)。取96孔板，按实验不同分组，每孔加入200μL工作液，将孵育6　　h的健康胚胎随机放入各孔中，每孔1枚，每组30枚。于人工气候箱中继续孵育至96h。在显　　微镜下观察记录各组胚胎的孵化和畸形。　　1.3.3斑马鱼自主运动和心率测定