体外传代培养对大鼠血管平滑肌细胞opn mrna表达的影响

《体外传代培养对大鼠血管平滑肌细胞opn mrna表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第31卷第3期青海医学院学报V0】．3lNo．32010生JOURNALOFQINGHAIMEDICALCOLLEGE2010体外传代培养对大鼠血管平滑肌细胞OPNmRNA表达的影响王生兰刘辉琦刘杰曹学锋王树人(1．青海大学医学院病理生理教研室；2．四川大学基础医学与法医学院病理生理教研室)摘要目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)表型标志分子骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)mRNA表达的影响。方珐选择未经培养传代的VSMCs和体外传代一至五代

2、的VSMCs作对比研究。用RT—PCR法检测VSMCs中OPNmRNA相对表达水平。结果体外培养至第一代时，VSMCs的OPNmRNA表达量较原代VSMCs显著增高(P<0．01)，且随传代代数的增加有逐渐增高趋势。结论OPN在原代VSMCs中表达甚微，体外培养可促使VSMCs多量表达OPN，OPN为VSMCs合成表型标志分子，即体外培养可促使VSMCs从收缩表型转为合成表型。关键词血管平滑肌细胞表型体外培养骨桥蛋白中图分类号R331．32文献标识码AINFLUENCEoFINVITRoCULTUREoNoPNmRN

3、AEXPRESSIONOFVASCULARSMooTHMUSCLECELLINRATSWangShenglan，LiuHuiqi，LiuJie，CaoXuefeng’，WangShuren(1．PathophysiologyDepartmentofQinghaiUniversityMedicalCollege；2．BasicMedicalSciencesandForensicMedicineSchoolofCichuanUniversity)AbstractObjectiveTostudytheinfluenceso

4、finvitrosubcultureonOsteopontin(OPN)mRNAexpres—sionofvascularsmoothmusclecells(VSMCs)inRats．MethodscomparedtheprimaryVSMCswithfirsttofifthpassagesanddetectedrelativeexpressionofOPNmRNAbyRT—PCR．ResultsExpressionofOPNmRNAinthefirstpassagewashigherthanprimaryVSMCs

5、(P<0．01)anditwasgraduallyhigherwithpassagesincreasing．ConclusionExpressionofOPNinprimaryVSMCsislesswhereascultureinvitrocanincreaseitsexpression．OPNiSthemarkerofsyntheticphenotypeinVSMCsandcuhureofVSMCsinvitrocantransforlnthecontractilepheno—typeintothesyntheti

6、cphenotype．KeywordsVSMCsPhenotypeCultureinvitroOPN血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，型)两种表型。损伤后在生长因子作用下，VSMCsVSMCs)分为分化型(收缩型)和去分化型(合成可由分化型转变为去分化型，从中膜向内膜下迁移王生兰(1970～)，女，汉族，青海籍，副教授157并增殖，合成大量细胞外基质(extracellularmatrix，细胞数接种于50mL的培养瓶中，在37℃、5％CO2ECM)，这个过程称为表型转化J。在高血压

7、(Hy—培养箱中培养生长至80％后，用Biozol提取总pe~ension)、动脉粥样硬化(AS)和血管成型术后RNA，方法按试剂盒说明进行。再狭窄(RS)等血管病变发生时，VSMCs在新生内膜1．2．3RT—PCR的扩增形成过程中暂时变成分化程度较低、更接近胚胎期1．2．3．1逆转录合成cDNA(reversetranscription，的未分化表型，而在增厚的新生内膜中，VSMCs又RT)：取RNA模板1g，5×RTBuffer4L，10Mm逐渐恢复为分化表型。在血管病变部位，表型发生的dNTPMixture2L

8、，super—R10．5L，RT—En·转化的VSMCs在增殖的同时合成与分泌各种细胞hancer0．5L，50pmol／l~L的Oligo(dT)181L，因子和细胞外基质，在AS斑块形成和RS发生过程ReverTraAce1L，加无RNA酶水至总体积为2O中发挥重要作用。由于多种心血管疾病都涉及到L，42cc反应40min，99℃反应5mi