豆粕发酵蛋白中抗原蛋白和不良寡糖的检测-论文.pdf

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1、《豆粕发酵蛋白中抗原蛋白和不良寡糖的检测李旺军，方华，季春源(上海源耀生物科技有限公司，上海201316)摘要：介绍了豆粕和发酵豆粕产品中抗原蛋白和不良寡糖的检测方法，并将从市场上收集到的不同生产厂家发酵豆粕产品，分别通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和薄板层析法检测其中抗原蛋白和不良寡糖的降解情况，同时做了简要分析。结果表明：不同厂家生产的发酵豆粕产品有很大的差异，抗原蛋白和不良寡糖的降解情况参差不齐：部分产品中的抗原蛋白和不良寡糖与豆粕相当，完全没有降解；抗原蛋白和不良寡糖均完全降解的产品并不多。关键词：豆粕；固态发酵；抗原蛋白；不良寡糖；聚丙烯酰胺

2、凝胶电泳法；薄板层析法；饲料中图分类号：$816．2；S816．42文献标志码：B文章编号：1003—6202(2013)04—0061—05豆粕中的抗营养因子分为两类：热稳定性抗营高了植物蛋白的消化吸收率；(3)发酵产品中会产生养因子，主要包括大豆抗原蛋白(球蛋白和J3一伴球蛋有益代谢产物，如含有2～3的有机酸；(4)通过白)和大豆寡糖(主要为水苏糖和棉籽糖)等；热敏性发酵，原料粗蛋白质含量得到浓缩，产品具有发酵香抗营养因子，包括胰蛋白酶抑制因子、脲酶和凝集素味，适口性好。等。热敏性抗营养因子通过加热的方法就能使其钝正因为有上述的优点，很多饲

3、料厂已将发酵豆化失活，膨化就是一种非常有效的方法；豆粕中的胰粕产品作为一种重要的蛋白原料列入配方，尤其是蛋白酶抑制因子、脲酶和凝集素等热敏性物质通过规模养猪场更是广泛使用这类产品。但是，目前饲原料灭菌即可使其失活，但球蛋白、j3一伴球蛋白、棉料厂遇到的一个最现实的问题是：市场上这类产品籽糖和水苏糖等热稳定性抗营养因子在一般的饲料良莠不齐，鱼目混杂，至今还没有出台统一的国家标加工过程中不易被破坏]。由于这些热稳定性抗营准或行业标准。为此，笔者根据多年的研究工作经养因子在动物的饲喂过程中会引起一系列的过敏反验，结合市场实际，以上海源耀生物科技有限公

4、司生应，因此需要通过其他方法在体外进行处理，采用微产的豆粕发酵蛋白为例，分别采用聚丙烯酰胺凝胶生物发酵法处理豆粕不仅成本低，对饲料营养成分电泳和薄板层析对比检测不同厂家的发酵豆粕产品的影响与破坏较小，而且可以同时去除多种抗营养中抗原蛋白和不良寡糖的降解情况并作简要分析，因子，还可积累有益的代谢产物和益生菌，这是豆粕供同行参考。进行发酵的主要目的j。发酵豆粕是一种新开发的优质蛋白质饲料原1抗原蛋白的定性检测料，可以弥补我国蛋白质饲料原料的不足。它是一抗原蛋白的定性检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳种利用现代生物工程发酵技术，以优质豆粕为原料，(SDS—P

5、AGE)E33。将大豆蛋白降解为小分子蛋白，并将抗营养因子彻1．1仪器设备底分解的优质蛋白原料。同时，在微生物发酵过程蛋白电泳仪：电泳仪(DYY一2C型)、电泳槽中产生大量有益代谢产物、乳酸、未知生长因子(DN一24型)、25l微量进样器、移液枪(1000、200、(UGF)等，因此发酵豆粕被认为是可以替代鱼粉、101)以及其配套枪头；制胶装置：与电泳槽配套出肉骨粉等动物蛋白的理想植物蛋白。最近几年，发售，包括玻璃板(厚度分别为1．0和1．51TIITI各酵豆粕产品受到饲料企业和养殖业的青睐，应用越1套)，梳子。来越广泛，它的主要优点总结起来有

6、以下4个方面：1．2试剂(1)发酵的方法能够很好地去除豆粕中的热稳丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵和N，N，定性抗营养因子，如抗原蛋白和不良寡糖；(2)通过N’，N四甲基乙二胺(TEMED)均购自上海某生发酵，部分大豆蛋白被微生物降解为小分子蛋白，提物科技有限公司，为分子生物等级(MB)；无水酒收稿日期：2O12一O9—28；修回日期：2O13O4一O1作者简介：李旺军(1979一)，男，硕士，工程师，主要从事微生物与发酵工程方面的研发工作。固李旺军等：豆粕发酵蛋白中抗原蛋白和不良寡糖的检测／2013年第4期精、甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷(Tr

7、is)、考马斯亮兰表2分离胶和浓缩胶的组成R250、甲醇、冰醋酸、甘油(丙三醇)、巯基乙醇、溴酚蓝、盐酸、十二烷基硫酸钠(SDS)，均为市售分析纯(AR)。1．3试剂的配置1．3．1备用溶液的配置质量分数3O丙烯酰胺母液：取丙烯酰胺30．0g、甲叉双丙烯酞酰胺0．8g，用蒸馏水定容至100ml棕色试剂瓶保存备用。质量分数1O过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于注：每次加完一种溶液后轻轻地晃动窨器便其混合均匀。10．00ml蒸馏水中。1．4分离胶的配制2．00mol／LTrisHC1(pH一8．8)：称取Tris将洁净的玻璃片置于制胶支架上(缺口朝里)，

8、121．14g溶于500mI蒸馏水中，用浓盐酸调节pH放平、压紧，按照要求的体积分别将30．0丙烯酰值至8．8(要求准确)。胺母液、4×分离胶缓冲液与