发酵豆粕的检测方法.pdf

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1、发酵豆粕中水溶性蛋白含量的测定1方法原理用水提取大豆中的水溶性蛋白，硫酸使含氮物转化成为硫酸铵，加强碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用标准盐酸滴定计算含氮量，乘以换算系数计算出大豆中水溶性蛋白的含量。2、试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。2.1硫酸（H2SO4）。2.2盐酸(HCl)。2.320g/L硼酸溶液：称取100g硼酸（H3BO4）溶于5000mL水中。2.4400g/L氢氧化钠溶液：称取2000g氢氧化钠（NaOH）溶于5000mL水中。2.5盐酸标准溶液[c(HCl)=0.1mol/L]：量取8.3mL盐酸，溶于

2、1000mL水中。标定：精密称取经270℃～300℃干燥恒重过的基准碳酸钠约0.15g，加水50mL溶解，加甲基红—溴甲酚绿混合指示剂10滴，用本液滴定到溶液由绿色变为紫红色。煮沸2min，冷却至室温，继续滴定到溶液由绿色变为暗紫色，同时做空白试验。盐酸标准溶液的浓度按式（1）计算：mC=………………………………………………(1)(V1−V2)×0.0530式中：m—无水碳酸钠的质量，单位为克（g）；V1—盐酸溶液用量，单位为毫升（mL）；V2—空白试验盐酸溶液用量，单位为毫升（mL）；0.0530—Na2CO3的毫克当量。2.6混合指示剂。1.0g/L甲基红乙醇溶液：

3、称取0.1g甲基红溶于100mL乙醇中；5.0g/L溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.5g溴甲酚绿溶于100mL乙醇中；两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。2.7混合催化剂[（CuSO4+K2SO4）=10+100]:称取10g硫酸铜（CuSO4·5H2O）和100g硫酸钾（K2SO4）,混匀，研磨，过0.42mm筛。2.8硫酸铵。3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。3.2分样筛:孔径0.45mm(40目)。3.3分析天平:感量0.0001g。3.4滴定管:酸式,25或10mL。3.5具塞三角瓶:250mL。3.6恒温振荡器。3.7消煮炉或电炉。3.8凯氏烧瓶:1

4、00或500mL。3.9凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。3.10三角瓶:250mL。3.11容量瓶:100mL。3.12消煮管：250mL。3.13定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。3.14离心机。3.15中速定性滤纸。4操作步骤与计算4.1游离氨含量的测定4.1.1操作步骤称取粉碎试样3-5g（精确至0.01g）于250mL三角瓶中。吸取100mL20℃蒸馏水于三角瓶中，振摇使试样不结块，均匀分散。将三角瓶固定于摇床，温度控制在(20士2)℃.，振荡60min。取下三角瓶，将溶液用中速定性滤纸过滤。过滤完毕后，取10mL上清液

5、，上机蒸馏、滴定；或采用常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式凯氏蒸馏装置蒸馏、滴定。4.1.2计算游离氨含量（﹪）={[(V-V0)×C×0.017×100]/(m×10)}×100%式中：V——滴定样品消化液所耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL)；V0——滴定空白消化液所耗盐酸标准溶液的体积，单位为毫升(mL)；C——盐酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；m——试样的质量，单位为克（g）；0.017——铵根离子的毫克当量数。4.2水溶性蛋白的测定4.2.1操作步骤称取发酵豆粕m3～5g（准确至0.0001g）于250mL具塞三角瓶内，准确加入100.00

6、mL蒸馏水。摇匀后，室温振荡30min，静置5min，将上清液倒入50mL离心管内,4800r/min，离心15min。取上清液10.00mL于消化管内，加入2g～3g混合催化剂，12mL浓硫酸，将蒸馏管置于通风橱中加热消化。开始用100℃低温加热0.5h，至黑泡沫消失，控制瓶中泡沫不超过瓶管的2/3，然后再升温至400℃～430℃，加热1.5h，至消化液呈透明的蓝紫色时，继续加热0.5h。冷却后，缓慢向消化管内加入约10mL蒸馏水，摇匀，冷却后蒸馏。2%的硼酸溶液吸收，0.1mol/L的盐酸溶液滴定，消耗盐酸体积V。4.2.2计算：CP水(%)={[（V-V0）×CH

7、CL×0.014×6.25×100]/(m×10)}×100%—游离氨含量（﹪）×0.014×6.25∕0.017式中：V——滴定样品消化液所耗盐酸标准溶液的体积，mL；V0——滴定空白消化液所耗盐酸标准溶液的体积，mL；C——盐酸标准溶液的浓度，mol/L；m——试样的质量，g；0.014━氮的毫克当量数；6.25━氮换算成蛋白质的平均系数。二、发酵豆粕中小肽含量的测定——三氯乙酸沉淀法1、方法原理试样用三氯乙酸（水）溶解后，使蛋白质和大分子肽沉淀，过滤，上清液消化蒸馏滴定，测定三氯乙酸（水）沉淀蛋白的量，减去游离氨的量既得小肽的量。2