Cry1Ab／Ac抗虫基因克隆与原核表达-论文.pdf

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1、第29卷第3期天津科技大学学报Vl0【．29No．32014年6月JournalofTianjinUniversityofScience&TechnologyJun．2014DOI：10．13364~．issn．1672-6510．2014．03．002Cry1Ab／Ac抗虫基因克隆与原核表达陈锐，朱珠，兰青阔，陈佳。，王永(1．天津市农业质量标准与检测技术研究所，天津300381；2．天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457；3．天津大学化工学院，天津300072)摘要：针对转基因水稻TT51-l插入的Bt基因

2、，扩增全长序列并克隆至pGEM—T载体．测序验证后利用HindIII与BamHI双酶切将Bt基因定向插入pET-28a载体．转化重组构建的pET-28a．cry至BL21(DE3)宿主茵，在0．1mmol／LIPTG诱导下获得以包涵体形式表达的目的蛋白．经SDSPAGE凝胶回收法获得相对分子质量约7．1×10的目的蛋白rCRY，为转基因作物检测新方法的开发提供了物质基础．关键词：转基因水稻；TT51-1；Bt基因；克隆；原核表达中图分类号：Q785；Q786文献标志码：A文章编号：1672．6510(2014)03—0006

3、04CloningandProkaryoticExpressionofInsect—resistantGeneCrylAb／AcCHENRui一，ZHUZhu，LANQingkuo，CHENJia，WANGYong(1．TianjinInstituteofAgriculturalQualityStandardandTestingTechnology，TianjinAcademyofAgriculturalSciences，Tianjin300381，China；2．CollegeofFoodEngineeringandBio

4、technology，TianjinUniversityofScience&Technology，anjin300457，China；3．SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，TianjinUniversity，Tianjin300072，China)Abstract：Thefull—lengthsequenceofintegratedBtgeneingeneticallymodifiedriceTT51-1wasamplifiedandclonedintopGEM-Tvector

5、．Aftersequencingwasconfirmed，theBtgenewasinsertedintopET-28aexpressionvectorusingHind1]landBamHI．TherecombinedpET-28a—crywastransformedintoEcoliBL2l(DE3)andtherecombinedtargetpro—tein(rCRY)wasexpressedinE．coliBL21(DE3)hostcellsunder0．1mmol／LIPTGinduction．Thepurifie

6、drCRYproteinwiththerelativemolecularmass7．1×10wasrecoveredfromSDS．PAGEgelbydenaturationandrefoldingofinclusivebodyprotein．ThisworkwouldbehelpfulforthedevelopmentofnewGMOsdetectionmethods．Keywords：GMrice；TT51-1；Btgene；cloning；prokaryoticexpression转基因技术在提高农作物产量、改善农产品

7、品Bt基因是目前抗虫转基因植物中使用最广泛的质、减少农药使用等方面正深刻地改变着现代农业格外源基因，其来源于苏云金芽胞杆菌(Bacillusthur—局．据统计_l1，2012年转基因作物种植面积已达ingiensis)，表达产物对多种农业害虫具有特异性毒1．7x10。平方千米，超过全球耕地面积的10％．转基因杀作用J．在转基因植物中，Bt蛋白表达占总可溶性试纸条检测法是以抗原与抗体互相作用的免疫学理蛋白的比例较高J，十分适用于试纸条方法检测．论为基础的一种针对蛋白的检测方法．该方法样品前本研究以转基因水稻TT51．1中的外

8、源Bt基因处理简单、操作快捷，不需要特殊仪器设备，对操作为研究对象，通过基因克隆、载体构建、原核表达与人员也无过高技术要求，十分适用于田间快速检测和纯化等步骤，开展转基因检测用Bt蛋白富集制备工产品成分筛查，在转基因检测市场具有广阔的应用作，为进一步研发试纸条检测产品提供物质基础与技前景．