时间分辨荧光免疫分析法测定HBsAg-论文.pdf

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1、150世界最新医学信息文摘2014年第14卷第24期·医学检验·时间分辨荧光免疫分析法测定HBsAg徐秋萍(黑龙江省江滨农场医院，黑龙江鹤岗154243)摘要：目的探讨时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎表面抗原rHBsAg)的方法。方法总结采用ELISA法测定病人血清标本的HBsAg的方法和结果。结论采用TRFIA法定量检测HBsAg灵敏度更高，线性范围更宽，在低浓度标本检测中更具优势，更具有临床意义。关键词：时间分辨荧光免疫分析技术；测定：HBsAg中图分类号：R446．6文献标识码：BDOI：10．39

2、69d．issn．1671．3141．2014．24．1l01原理6操作程序，采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法fIFMA法)。6．1试剂的准备以单克隆抗一HBs抗体包被反应板，用铕标记试剂(DTTA—Eu16．1．1洗涤液：将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在标记抗一HBs。加入待测样本后，样本中的HBsAg与包被于干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。微孔板上的单克隆抗体结合，洗涤后加入铕标记的抗一HBs—6．1．2铕标记物：使用前1h内用铕标记稀释液按1：DTTA—Eu，与已结合在板上的HBs

3、AG反应，在微孔表面形5O倍稀释，并一次用完(使用一次性的塑料容器来配制)。成抗一HBs—HBsAg一抗一HBs—DTTA—Eu复合物。洗涤去除6．2将试剂及所需数量的微孔反应条置室温游离的铕标记抗一HBs，加入增强液(B—NTA)将复合物上(20—25℃，下同)平衡。的Eu3+解离到溶液中，并与增强液中的有效成分形成高荧6．3吸取100l阴性、阳性对照及待检样本，按顺序光强度的螫合物，其荧光强度与样本中的HBsAg浓度成正加入微孔中并加贴封片。比。通过测定荧光强度，可测定血清样本中的HBsAg。6．4微孔

4、反应条在室温下，用振荡仪缓慢振摇孵育40rain。2标本采集6．5在第一次孵育结束后，小心将微孔反应条上的封2．1样品采集片揭下并弃掉，将微孔反应条放入洗板机吸干各孔并每孔采集新鲜无抗凝静脉血2—3ml，采用离心法分离出血注入洗涤液400l，再吸干各孔，重复以上洗涤4次，最清。血清样本2～8qC可保存6d，一20qC可长期保存。避免后一次将微孔反应条拍干。反复冻融。6．6每孔中加入100l铕标记物工作液，并加贴封片。2．2注意事项6．7微孔反应条在室温下，用振荡仪缓慢振摇孵育由于EDTA、柠檬酸盐会与铕发生

5、螯合反应，因此，不40rain。能使用含有这些物质抗凝的血浆，但可以使用肝素抗凝血6．8第二次孵育结束后，小心将微孔反应条上的封片浆。揭下并弃掉，将微孔反应条放人洗板机吸于各孔并每孔注3试剂入洗涤液400l，在吸干各孔，重复以上洗涤6次，最后3．1试剂来源：苏州新波生物技术有限公司提供的乙一次将微孔反应条拍干。型肝炎病毒表面抗原定量检测试剂盒(时间分辨免疫荧光分6．9每孔中加入增强液100l(加样过程中避免碰到小析法1。孔边缘或其中的试剂，尽量避免污染)，并加贴封片。3．2试剂组成：HBsAg校准品A—F各

6、1瓶(1．5ml／瓶)；6．10微孔反应条在室温下，用振荡仪轻摇5rain(在铕标记物1瓶(0．2m1)，使用前按需求量做1：50倍稀释；30min内完成测定1。浓缩洗液l瓶(40ml1，使用前去离子水按l：25倍稀释；铕7质量控制标记稀释液1瓶(20m1)；微孔反应板1块(12孔×8条，包7．1浓度：>150ng／ml的血样标本应稀释后重新计被有抗一HBs的单克隆抗体)；增强液1瓶(20m1)。算浓度值，稀释后浓度值应在线性范围内。3．3试剂保存：28℃可保存至瓶上标签所示的失效7．2质控品于2～8℃保存

7、，开封后需在1周内用完。期，增强液于28℃可保存至瓶上标签所示的失效期，室使用前需置室温20min，并充分振荡、摇匀。温f2025)下可保存6个月，避免阳光直射；使用前试7．3质控检测完成后，在《ANYTEST时间分辨荧光分剂各组分应平衡至室温，用后立即保存于2—8℃。析室内质控记录表》上登记质控记录；参照Leveyjennings3．4质控品：由卫生部临检中心或广东省临检中心质控图控制，发现失控时填写失控报告，查出失控原因并提供。每瓶质控品千粉用5ml蒸馏水稀释，室温放置做相应的处理。15—20min，吸

8、样前轻轻摇匀数遍保证完全混匀。未开启的7．4A值计数值应<5000，F点计数值<1000000，质控品于28℃保存至瓶上标签所示的失效期，复溶后密剂量反映曲线的线性关系系数R值应>0．9800，否则应重新封置2—8℃可保存10d，分装后一18一一20℃保存3个月。进行实验；实验应符合典型的剂量一反应曲线，否则也应4仪器性持续半年或1年以上为HBV慢性携带者，母婴传播可携上海新波生物技术有限公司ANYTEST200