叶片横切的程序.doc

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1、叶片横切的程序石蜡包埋：第一天下午6点冷水浸泡材料。第二天10点30用开水煮22分钟，冷却，11点25固定。固定液:50%乙醇60毫升＋甲醛3.7毫升＋冰醋酸4毫升。第三天上午8点05水洗后放入75％乙醇中脱水；8点35换95％乙醇；9点03换纯乙醇；9点21换第二次纯乙醇；9点45换1/2二甲苯＋1/2纯乙醇；10点45换纯二甲苯；12点加石蜡放入35℃烘箱中；6点再加石蜡；10点30第二次加石蜡。第四天上午8点升温至60℃；至60℃后换烧杯蒸发2小时；再换60℃的液体纯石蜡（用电炉融化后过滤；预先放入烘箱中达60℃）；3－4个小时再换第二次液体

2、纯石蜡；第三次等。最后包埋，将处理好的材料放入包埋盒中，等石蜡凝固后，再放到水槽里冲洗，以免包埋好的石蜡进水，切片时容易碎。切片：将包埋好的石蜡切成小块，粘在小木块上，放入石蜡切片机上切。取一载玻片，在载玻片上滴一滴粘片剂，用手摸匀，再在其上滴一滴水。将切好的石蜡片（超薄），放入有水的载波片上，放在电炉上微烤，直至石蜡片完全舒展，平铺在载玻片上。镜鉴：将作好的石蜡片子，放在显微镜下观察，如果叶片的上下表皮完好或撕裂程度不大，贴好标签，放好待用。封片：纯二甲苯（2小时40℃，在烘箱中进行）→1/2二甲苯＋1/2纯乙醇→纯乙醇→75％乙醇→水→番红（1

3、％的乙醇50％）1.5－2小时→水→龙胆紫（1％）2分钟→大盆水洗→75％乙醇→95％乙醇→100％乙醇→100％乙醇→1/2二甲苯+1/2纯乙醇→纯二甲苯→纯二甲苯→中性树胶封片。注意：第一步的纯二甲苯脱石蜡应2小时以上，（温度40℃放入烘箱中）；再番红染色液中停留2小时，如新鲜番红染色液1.5小时也可。其余各缸3－5分钟，每缸只能放8－9个片子。明胶粘片剂：明胶（粉末）1g蒸馏水100ml石炭酸2g甘油15ml先将粉末状的明胶徐徐溶入微温（36℃）的100g蒸馏水中，待全部溶解以后，再加入2g石炭酸的结晶与15ml甘油，搅拌使完全溶解，然后过滤

4、，储存于有玻璃塞的瓶子中待用。外稃表皮的实验方法新鲜叶片自FAA中取出，蒸馏水冲洗，置入铬酸（10％）－硝酸（10％）溶液（1：1）40℃温箱中处理0.5－4小时，待叶肉组织和上下表皮开始分离时，将材料取出用水洗净，移至50％酒精中备用。制片时，将材料置于载玻片上，用刀片和针尖轻轻刮去叶肉组织，将表皮用1％番红酒精溶液染色约0.5－3分钟后，制成永久玻片。外稃处理方法同叶片。