儿茶素活性成分分子印迹聚合物的分子识别特性及固相萃取研究.pdf

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1、第33卷分析化学（FENXIHUAXUE）研究简报第6期2005年6月ChineseournaIofAnaIyticaIChemistry857~860儿茶素活性成分分子印迹聚合物的分子识别特性及固相萃取研究＊雷启福钟世安向海艳周春山于典（中南大学化学化工学院，长沙4l0083）摘要以表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）为模板分子，!-甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，合成EGCG分子印迹聚合物。利用该聚合物对EGCG及其异构体和结构类似物进行分子识别特性研究。结果表明：分子印迹聚合物对模板分子具有较高的选择性和识别能力，而空白聚合物却不具

2、备这样的特性。在此基础上，把聚合物用于固相萃取茶叶提取物茶多酚，分离富集其中的儿茶素活性成分单体EGCG，获得了满意的效果。关键词分子印迹聚合物，分子识别，固相萃取，表没食子儿茶素没食子酸酯1引言儿茶素活性成分是茶叶中的特有成分，主要包括表没食子儿茶素没食子酸酯（epigaIIocatechin-gaI-Iate，EGCG）、没食子儿茶素没食子酸酯（gaIIocatechin-gaIIate，GCG）、表儿茶素（epigaIIocatechin，EC）、儿茶素（catechin，C）、表儿茶素没食子酸酯（epicatechinGaIIate，ECG）、儿茶素

3、没食子酸酯（catechinGaI-［l］Iate，CG）、表没食子儿茶素（epigaIIocatechin，EGC）和没食子儿茶素（gaIIocatechin，GC）等。由于EGCG具有优异的抗氧化、抗癌、防癌功能，其分离纯化成为各国医药、食品界的研究热点。分子印迹聚合物（MoIecuIarimprintedpoIymers，MIP）是为印迹分子量身定做的高分子聚合物，洗去模板分子以后，能留下在形状、大小以及识别位点都与模板分子相匹配的空穴，该空穴能重新识别模板［2，3］分子。MIP已广泛应用于固相萃取（SPE），包括清除环境和生物样品中的杂质和从复杂样品

4、中富集［4~6］［7］有效成分。最近，也有人开始把MIP用于固相萃取中药中的有效成分。由于固相萃取对MIP的微粒单分散性要求不高，本研究采用本体聚合法合成对EGCG具有识别能力的分子印迹聚合物，并尝试把该聚合物用于固相萃取茶叶提取物茶多酚（teapoIyphenoIs，TP）中的EGCG。2实验部分2.1仪器和试剂高效液相色谱（HPLC）系统：BT8l00泵、BT8200UV-VIS检测器以及C-R6A数字积分记录仪（德国Biotronik），ProdigyODSCl8色谱柱（250X4.60mm，5!m，美国Phenomenex）；TGL-l6G冷冻离心机

5、（上海科学仪器厂）；ZD-2调速多用振荡器（江苏望华科教仪器厂）。EGCG、GCG、EGC、ECG（长沙华欣科技开发有限公司）；偶氮异丁腈（AIBN，上海试剂厂）；甲基丙烯酸（MAA，天津市科密欧化学试剂厂）；乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA，上海和氏璧化工有限公司）。MAA和EGDMA使用前减压蒸馏除去阻聚剂。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。2.2EGCG分子印迹聚合物的制备将EGCG0.9l68（g2mmoI）、MAA0.6887g（8mmoI）溶解于适量的氯仿，静置过夜。在加入EGD-MA7.9200（g40mmoI）、AIBN0.0657g（0.4m

6、moI）后，超声处理20min，使其充分溶解。混合溶液中通入N2l5min后密封，于0C，366nm紫外灯光照下聚合48h，使聚合反应完全，得坚固的棒状固体聚合物（MIP）。将该聚合物粉碎、过45!m筛，用91l的甲醇乙酸溶液（体积比）在索氏提取器中回流l8h，除去印迹分子，最后用乙腈反复沉降以除去细小颗粒，真空干燥，备用。制备空白聚合物（BP）时，除不2004-06-29收稿；2004-ll-08接受本文系湖南省自然科学基金资助项目（No.043080），国家中小企业创新基金项目（No.02C262l4300675）858分析化学第33卷加模板分子以外，其

7、它方法同上。2.3HPLC检测条件EGCG、GCG、ECG、EGC等4种儿茶素单体均采用下列色谱条件检测：色谱柱为ProdigyODSCl8柱（250mmX4.60mm，5!m），流动相为甲醇1乙酸1水（24.510.5175，!"!），流速为0.8mL/min，进样量为6!L，检测波长为278nm。定量分析方法见文献［8］。2.4分子识别及固相萃取实验将40.0mg制得的干MIP于带盖的聚四氟乙烯瓶中，加入3mL不同浓度EGCG与GCG的混合乙腈溶液，在室温下振荡l2h，离心分离，取上清液用0.45!m的微滤膜过滤后，于HPLC上检测各组分的平衡浓度。根据

8、结合前后溶液中浓度的变化分别计算聚合物对两个底物的结