低氧对大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞功能的影响.pdf

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1、2014拄4月首都医科大学学报Apr．2014第35卷第2期JournalofCapitalMedicalUniversityVo1．35No．2[doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2014．02．018]·基础研究·低氧对大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞功能的影响国桓王望孙然刘杰王军(首都医科大学基础医学院生理学教研室，北京100069)【摘要】目的培养鉴定大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞(pulmonarya~erysmoothmusclecells，PASMCs)，探讨其对缺氧刺激反应性的不同。方法酶消化法分离大鼠不同级别PASMCs并

2、分为3组：大肺动脉组，包括肺动脉干及肺内一级主干；中动脉组，包括肺内主干的第二级和第三级分支；小肺动脉组，包括肺内主干四级分支后的更细小分支。分别给予常氧(DMEM+2％FBS、5％CO2、21％O2、37oC)和低氧(DMEM+2％FBS、5％CO2、3％O2、37oC)培养48h，用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyltetrazolium，MrlT)比色法和Westernblotting检测增生细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)的蛋白表达水平的方法检测细胞的增生能力；应用伤口愈合实验检测细胞

3、的迁移能力。结果倒置显微镜下PASMCs呈现长梭形，免疫荧光法检测平滑肌细胞标志物即平滑肌肌动蛋白(o／．一smoothmuscleactin，ot—SMA)为阳性，生理情况下(常氧)，3组肺动脉平滑肌细胞增生及迁移能力均较一致；低氧培养48h后，中小肺动脉平滑肌细胞的增生与迁移能力均显著高于大动脉，PCNA结果与MqT结果一致，差异具有统计学意义(P<0．05)。结论在低氧条件刺激下，不同级别肺动脉平滑肌细胞反应性不同，中小肺动脉平滑肌细胞的增生及迁移能力均显著高于大肺动脉平滑肌细胞。【关键词】肺动脉平滑肌细胞；低氧；增生；迁移【中图分类号】R332Efe

4、ctsofhypoxiaonthefunctionofsmoothmusclecellsfromdiferentordersofpulmonaryarteriesGuoHuan，WangWang，SunRan，LiuJie，WangJun(DepartmentofPhysiology，SchoolofBasicMedwalScience，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)【Abstract】ObjectiveToexploretheefectsofhypoxiaontheproliferationand

5、migrationofratpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs)isolatedandculturedfromdiferentordersofpulmonaryarteries．MethodsThepulmonaryarterybranchesweregentlyisolatedfrommaleSprague-Dawleyrats(250—350g)fromCapitalMedicalUniversityandeventuallycutintothreegroupsaccordingtothevasculargra

6、ding：theproximalpulmonaryarteries(pulmonarytrunkandthefirstorderbranchesoftheintrapulmonaryarteries)，themiddlepulmonaryarteries(secondtothirdorderintrapulmonaryarteries)，andthedistalpulmonarya~eries(forthtofifthorderintrapulmonaryarteries)．PrimaryPASMCswereculturedfromthepulmonarya

7、rteriesandot-smoothmuscleactin(一SMA)inthecellswasidentifiedbyimmunofluorescence．PASMCswereculturedundernormoxia(DMEM+2％FBS，5％CO2，21％O2，37oC)andhypoxia(DMEM+2％FBS，5％CO2，3％O2，37℃)．Cellproliferationwasquantifiedbyusing0．5g／Lmethylthiazolyltetrazolium(MTr)assay．Westernblottingwasusedfo

8、rdetectingtheproteinexpres