分子标记技术检测家蚕品种抗BmNPV性能.pdf

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1、江苏农业科学2013年第41卷第6期一41一钱荷英，高丽，张月华，等．分子标记技术检测家蚕品种抗BmNPV性能[J]．江苏农业科学，2013，41(6)：41—43分子标记技术检测家蚕品种抗BmNPV性能钱荷英，高丽，张月华，孙平江，徐安英(江苏科技大学蚕业研究所，江苏镇江212018)摘要：通过经口添饲家蚕核型多角体病毒BmNPV，比较家蚕新品种871C、872C及其杂交种和871、872及其杂交种对BmNPV抵抗性的强弱，结果表明，家蚕新品种具有很强的抗BmNPV性能。用分子标记技术对不同品种进行辅助选择，抗性品种871C、872C显示为阳性，而易感品种871、872显示为

2、阴性；并在抗病品种中扩增出长度为999bp的DNA片段，推测该分子片段与家蚕品种的抗BmNPV性能相关。关键词：家蚕；BmNPV；抵抗性；分子标记中图分类号：$884．51文献标志码：A文章编号：1002—1302(2013)06—0041～03家蚕核型多角体病毒病，俗称“血液型脓病”，是由于家BmNPV能力，为培育优质、高产、具长久稳定抗BmNPV能力蚕感染了家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuclearpolyhe．的实用新品种奠定基础。dmsisvirus，BmNPV)而引发的，是目前生产上主要的家蚕病1材料与方法害，对蚕茧生产造成了很大危害。自1947年Berg

3、old分离纯化出家蚕脓病病毒⋯以后，各国科学家对该病毒的结构、侵1．1家蚕品种染方式和途径、遗传规律，以及针对该病毒提出的各种防病、供试的家蚕品种为871、872、871×872、872×、871、871C、抗病措施等进行了研究。，并取得了一定进展。从育种角872C、871C×872C、872C×871c(带C为抗BmNPV品种)，均度来说，培育对病原有强抵抗力的品种将是最有效、也是最环由中国农业科学院蚕业研究所品种资源室提供。保低碳解决生产问题的途径。近年来，随着分子生物学技术1．2主要试剂及工具酶的进步，各种分子标记的开发和利用在抗病育种中得到了很蛋白酶K、PCR回收试剂盒

4、、TaqDNA聚合酶、PCR配套好的利用。。J。缓冲液、4dNT等购自TaKaRa公司，JM109感受态细胞、Ecoli笔者从保存的家蚕种质资源中获得了一份抗病材料，经菌株等为上海生工生物工程公司产品。遗传分析所发现的抗病基因为显性主基因遗传模式。以1．3引物合成春用蚕品种871、872和耐病主基因的载体品种为育种亲本，根据GenBank中已经公开的与家蚕BmNPV抗性基因连采用基因导入、杂交、回交、纯合固定等方法，导入耐病主基因锁的DNA序列(AY380833．1)，用Pfime~．0软件设计1对特获得蚕新品种，该品种于2011年通过四川省蚕品种审定委员异性弓l物antiNP

5、V—F(5一TcACACAGTCAAAAcccGT一3)会审定。和antiNPV—R(5一TGTAGAAAATCCTCCCCCT一3)。弓l物从已育成的抗性品种推广情况看，一般隔若干年后往往由上海生工生物工程有限公司合成。会因为基因漂流、新变异产生u、地理环境的改变等原因造1．4攻毒方法成品种的抗病能力降低。因此，每隔几年应该对品种的抗病采用经口添毒的方式，将1×10NPV多角体／mL浓度的性做测试，检验抗病能力是否下降，以便及时研究应对措施，病毒逐级稀释成1×10、1×10、1×10、1×10多角体／mL，防止因抗病基因的遗失给生产上带来消失。另外，用分子标共5个浓度梯度；8

6、71、872及其杂交种(正反交)用1×10～记辅助育种的手段，从分子水平(DNA)上准确地追踪抗性基1×10多角~k／mL这4种病毒浓度添毒，871C、872C及其杂因或者与抗性基因连锁的DNA片段，则可以大大缩短育种年交种用1×10～1×10’多角~k／mL这4种病毒浓度添毒。限，提高检测抗病性能的效率。取2龄蚕，分别数3O头于二重皿中，然后将不同浓度的病毒通过经口添毒的方法，比较抗病家蚕品种与原系统抗液涂抹于直径为2cm的桑叶上，每张叶片5O，稍干燥后BmNPV能力，用分子标记技术开展抗病基因筛选，并用抗病每个试验区给桑叶4张(可在二重皿盖上平铺湿纸补湿)。基因(与抗病基因

7、连锁的分子标记)检测家蚕品种的抗24h后饲喂新鲜桑叶，每天2次，统计病蚕头数，用SPSS16计算半致死浓度(Lc。)，调查抗病品种及原系统品种的抗病性。收稿日期：2012—11—091．5基因组DNA的提取基金项目：江苏省镇江市科技支撑计划(农业)(编号：NY2010026)。参照夏庆友等的方法，取试验品种的家蚕蛾子头部放作者简介：钱荷英(1971一)，女，江苏溧阳人，硕士，副研究员，主要从入加有家蚕基因组DNA抽提缓冲液(10mmol／LTris—HC1，事家蚕遗传育种研究。Tel：(05