DB13∕T 5159-2019 辣椒红中反式辣椒红素含量的测定.pdf

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1、ICS67X04DB13河北省地方标准DB13/T5159—2019辣椒红中反式辣椒红素含量的测定2019-12-27发布2020-01-28实施河北省市场监督管理局发布DB13/T5159—2019前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由邯郸市市场监督管理局提出。本标准起草单位：晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院。本标准主要起草人：杨清山、王红、陶晓青、张兰天、刘亚玲、李挥、季邵东、周丽、石文杰。IDB13/T5159—2019辣椒红中反式辣椒红素含量的测定1范围本标准规定了辣椒红中反式辣椒红素的高效液相色谱测定方法。本标准适用于辣椒红中反式辣

2、椒红素的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理反式辣椒红素是辣椒红的主要成分，属于类胡萝卜素类，其在辣椒红中的天然存在状态是反式辣椒红素酯。反式辣椒红素酯经过碱液皂化后，均转化为游离的反式辣椒红素。使用紫外-可见分光光度法测得辣椒红中的总类胡萝卜素含量，再使用高效液相色谱法测得反式辣椒红素在液相图谱中的面积归一化比例，以总类胡萝卜素含量乘以反式辣椒红素比例得到反式辣椒红素含量。4试剂或材料除非另

3、有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。4.1试剂a)正己烷（C6H14）：色谱纯；b)甲醇（CH4O）；c)无水乙醇（C2H6O）；d)甲苯（C7H8）；e)丙酮（C3H6O）：色谱纯；f)乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯；g)氢氧化钾（KOH）；h)无水硫酸钠（Na2SO4）。4.2试剂配制4.2.1萃取剂（HEAT）：将正己烷、无水乙醇、丙酮、甲苯按10:6:7:7的体积比例混合摇匀。4.2.240%氢氧化钾—甲醇溶液（m/v）：取氢氧化钾40g（精确至0.1g）于250mL烧杯中，加入约10mL水迅速用玻璃棒搅拌溶解后，加入甲醇50mL，搅拌至澄清

4、，移入100mL容量瓶中，用甲醇定容、摇匀静置待用。其应为无色透明液。1DB13/T5159—20194.2.310%无水硫酸钠溶液（m/v）：称量无水硫酸钠100g（精确至0.1g）于500mL烧杯中，加水溶解后转移到1000mL容量瓶定容。4.3对照品辣椒红素：（CAS:465-42-9）：对照品，纯度≥90%。4.4标准溶液配制辣椒红素对照品溶液：将适量对照品溶解至25mL正己烷中，用作峰位置定性使用，置于-20℃冰箱保存，有效期1年。5仪器和设备a)高效液相色谱仪（配备紫外检测器或其他等效检测器）；b)紫外-可见分光光度计；c)电子天平：感量为0.1g和0.01mg；d)恒温

5、水浴锅。6试验步骤6.1样品液制备称取0.15g（精确至0.1mg）样品置于50mL容量瓶中，用HEAT定容，摇匀后放在暗处静置10min。移取5mL到另一个100mL容量瓶中，再加入25mLHEAT和4mL40%的氢氧化钾—甲醇溶液。摇匀后放入25℃恒温水浴锅静置皂化30min。皂化完后加入30mL正己烷，用10%的无水硫酸钠定容。剧烈摇动2min放在暗处静置1h进行分层（分层后的上层溶液体积为50mL）。移取上清液5mL到50mL容量瓶，用正己烷定容，得到紫外-可见分光光度计测试液。上清液过0.45μm有机滤膜后用作高效液相色谱仪测试液。6.2测定6.2.1色谱参考条件色谱参考条

6、件如下：a)色谱柱：硅胶填料，250mm×4.6mm，5m，或性能相当者；b)流动相：正己烷-丙酮-乙酸乙酯：74+11+15（体积比）；c)柱温：40℃；d)检测波长：474nm；e)流速：1.5mL/min；f)进样量：20L。6.2.2测定6.2.2.1总类胡萝卜素含量测定将紫外-可见分光光度计测试液用分光光度计在474nm处，用正己烷做参比液，于1cm比色皿中测定其吸光值，吸光度应控制在0.3～0.7之间。6.2.2.2反式辣椒红素比例测定2DB13/T5159—2019按照参考液相色谱条件，分别检测辣椒红素对照品溶液和样品高效液相色谱仪测试液，测试液运行时间需大于2倍的反式

7、辣椒红素保留时间，记录色谱图，见附录A。对样品色谱图中的所有可见峰进行积分，以辣椒红素对照品中反式辣椒红素的保留时间定性，从积分结果中得出样品中反式辣椒红素的峰面积百分比。7试验结果7.1样品中的总类胡萝卜素含量样品中的总类胡萝卜素含量按公式（1）计算。AVW0……………………………………………（1）M200式中：W0——样品中总类胡萝卜素的含量，单位为克每千克（g/kg）；A——样品液在474nm处测得的吸光值；V——样品液的最终稀释体积，单位为毫