Nrf-2在COPD合并肺间质纤维化中的作用机制探讨-论文.pdf

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1、2013年11月25日第22卷第z1期Chin中aPIhar荔maceuticalS·论著·Vo1．22，No．Z1，November25，2013Nrf一2在COPD合并肺间质纤维化中的作用机制探讨崔海涛．马桂莲，匡建梅(山东省青岛市胶州中心医院，山东青岛266300)摘要：目的观察核因子E2相关因子2(N2)在COPD合并肺间质纤维化模型大鼠肺组织中的表达及在COPD合并肺间质纤维化患者血清中的浓度变化。方法健康雄性SD大鼠3O只，随机分为正常对照组＼28d模型组与42d模型组，以吸烟联合脂多糖建立大鼠COPD合并肺

2、间质纤维化模型，WesternBlot法测定大鼠肺组织中N2的表达；选择56例COPD合并肺间质纤维化患者为观察组，34例单纯COPD患者为对照组。ELISA法测定观察组与调查组患者血清N2浓度。结果WesternBlot结果显示，28d模型组大鼠肺组织N2蛋白表达水平较正常对照组相比显著升高，42d模型组大鼠肺组织Nrf-2蛋白表达水平较28d模型组与对照组相比均降低，差异均有统计学意义(P<0．05)；ELISA结果显示，COPD合并肺间质纤维化患者血清Nrf一2蛋白浓度与单纯COPD患者相比，差异没有统计学意义(P

3、>0．05)。结论N2在COPD合并肺间质纤维化中进展过程中可能起到重要作用，其作用机制有待深入研究关键词：慢性阻塞性肺疾病；肺间质纤维化：核因子E2相关因子2中图分类号：l46文献标识码：A文章编号：1o06-4931(2013)Z1—0117-02肺间质纤维化是慢性阻塞性肺疾病(COPD)进展过程中一液，考马斯亮蓝法进行蛋白浓度的测定，取总蛋白50g，经个重要的病理改变，是影响COPD患者预后的重要因素之一。10％SDS—PAGE电泳分离后．转移至聚偏二氟乙烯膜(PVDF)氧化应激在肺间质纤维化的发生发展中起到重要作

4、用，核因子上，用封闭液室温封闭lh，弃去封闭液，加人Nrf-2的特异性抗E2相关因子2(Nrf-2)是细胞中参与氧化应激反应的一类细胞体(1：1000稀释)，4℃孵育过夜。洗膜后加辣根过氧化酶标记因子，其可在氧化应激信号的刺激下，发挥抗氧化作用，保护细的IgG(1：5000稀释)，置于脱色摇床上充分反应1h。加入ECL胞不受氧化损伤。本次研究以动物试验和人群流行病学调查为显色剂。采用凝胶图像分析系统对蛋白条带进行分析，用测量基础，探讨氧化应激类因子Nrf_2在COP])合并肺间质纤维化得到的N~f-2／13一actin灰

5、度比值作为Nf_2蛋白的相对表达量。中的作用机制，为防治COPD合并肺间质纤维化提供依据。1．3人群流行病学调查1资料与方法调查对象：选择2010年10月至2012年7月来我院就诊的1．1试剂与动物56例COPD合并肺间质纤维化患者为观察组．同时选择34例Westernblot试剂盒、PVDF膜、兔抗Nrf-2特异性抗体，辣单纯COPD患者为对照组，两组患者在性别、年龄、平均病程方根过氧化物酶标记的二抗、ELISA试剂盒。面无显著性差异(P>0．05)。采取空腹静脉血5mL，离心后取血健康雄性SD大鼠30只，随机分成3组

6、，正常对照组：不做清待测。任何处理，自由进食。28d模型组：置于有机玻璃熏箱内，吸烟诊断标准：COPD的诊断按照2002年中华医学会呼吸病学每天2小时。并在第1天、第15天气管内注入200txg的脂多分会制定的诊断标准，在此标准的基础上出现肺部Velcro哕音糖，第28天处死。42d模型组，置于有机玻璃箱熏箱内，吸烟每或可见杵状指(趾)，肺功能测定结果为不完全符合阻塞或限制天2小时。并在第1天、第15天、第28天气管内注入200Ixg性通气功能障碍，胸片有点状、结节状、网状或蜂窝状阴影，CT的脂多糖，第42天处死。显示肺

7、气肿和肺间质纤维化双重特点者，诊断为COPD合并1．2WesternBlot法测定大鼠肺组织中Nrf一2的表达肺问质纤维化。处死大鼠肺组织加入组织裂解液。冰浴30min离心取上清ELISA法测定观察组与对照组患者血清Nrf-2浓度：室温，，，，ll"，'''''，，l，’'''''，ll11"，’'，lll’''ll"'，，11"，，’，ll，’，'l11"11"'，，'，，，’’'，'，，，ll"'''l'll，1"，~IP3"，'，，l，’'液循环中．导致急性肾衰竭、电解质紊乱等一系列并发症。肌酸清除终末期肾病的代谢

8、废物、毒物、致病因子以及调节水、电解激酶主要存在于以磷酸肌酸为能量来源的组织和器官，骨骼肌质的传递和平衡，从而达到内环境的平衡有关。因此，组合型人的轻微病变即可引起肌酸激酶的明显升高。肌酸激酶同工酶主工肾可显著降低患者血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸要存在于心肌细胞浆内．是心肌特异性同工酶，当心肌细胞受氨基转移酶