电击法转化农杆菌.doc

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1、电击法转化农杆菌需要时间：电击操作40min左右+培养4h（期间可以干别的事）+涂平板操作20min左右+培养48h电转化杯：平时洗净放酒精中；大肠杆菌用2mm；农杆菌用4mm或2mm(4mm好用些）大肠杆菌：37℃培养24小时（生长较快），1500V/6ms电击农杆菌：28℃培养48小时（生长较慢），2500V/6ms电击离心管：1.5mL下端尖2mL下端圆比例：40μL感受态农杆菌(GV3101):1μL质粒（用手指弹几下混匀）具体操作过程：1、将20μL农杆菌和0.5μL质粒混匀，2、用枪加入4mm电转化杯中，盖上盖，贴标签，3、在电击器上2500V/6ms进行电击，

2、促使质粒进入农杆菌，4、电击后，用枪将液体移到装有500μLLB培养液的2mL离心管中，5、写标签，用石蜡膜封口，6、在28℃生化培养箱中摇晃培养4h左右，让菌在有氧条件下复苏，7、将离心管进行离心1min，使菌体沉降到管壁上，8、准备LB平板，写标签，用酒精擦拭三角玻璃棒，然后在火焰上烧10s左右灭菌，放置冷却备用，9、用枪吸取100μL上清液，将剩下液体倒掉，在将枪中液体打入离心管中，并用枪反复吸打，冲下壁上菌体混匀，（涂平板时100μL就够了，所以进行离心浓缩）10、吸出菌液，滴在平板上，用玻棒涂抹均匀，11、盖上盖，用石蜡膜封口，放入28℃生化培养箱中48h（2天）

3、，即可长出菌落。