血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳【精品-ppt】

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1、实验3血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳（Celluloseacetatemembraneelectrophoresisofserumproteins）遵义医学院生物化学教研室朱欣婷蛋白质的理化性质有哪些？实验本次实验利用了哪个性质？思路蛋白质的分离方法有哪些？生物化学教研室朱欣婷1.掌握电泳法分离蛋白质的原理；2.掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的原理和方法；3.进一步熟悉721型分光光度计的使用生物化学教研室朱欣婷分离蛋白质的方法盐析法沉淀法有机溶剂沉淀法离子交换层析吸附层析分离方法层析法凝胶过滤（分子筛）电泳法亲和层析电学法

2、等电聚焦超速离心法生物化学教研室朱欣婷（一）电泳技术(electrophoresis)电泳：带电粒子在电场的作用下向着与其电性相反的电极移动的现象。电泳技术:指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。生物化学教研室朱欣婷一、电泳的原理以蛋白质为例：-COOCOO-COOHH＋＋HPrPrPrOH－OH－NH+NH2NH+33pH>pIpH=pIpH

3、半径η—介质的粘度生物化学教研室朱欣婷二、影响电泳速度的因素1.样品本身：分子带电量：Q越多，u越大；分子大小：分子小，r越小，u越大；分子形状：形状越小，与支持物介质摩擦越小，u越大。球形分子>纤维状分子生物化学教研室朱欣婷2.缓冲溶液：pH值：(pH-pI)越大，Q越多，u越大离子强度(I)：I越大，电动电势越小，u越小；I越小，电动电势越大，u越大，但样品易扩散。离子强度如果过低，缓冲液的缓冲容量小，不易维持pH恒定选择离子强度时要两者兼顾，一般离子强度的选择范围在0.02～0.2之间。生物化学教研室朱欣婷3.电场强

4、度(X)电场强度：电泳支持物上每厘米的电位降，也称电势梯度。X越大，u越快。支持物越短，X越大，u越快。电场强度越大或支持物越短，电流将随之增加，产热也增加，影响分离效果。在进行高压电泳的时候必须用冷却装置，否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离。生物化学教研室朱欣婷4.支持介质：目前常用的电泳支持物：①纤维薄膜(玻璃纤维薄膜，醋酸纤维薄膜)②凝胶(琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶)生物化学教研室朱欣婷电渗作用：电渗：在电场作用下液体对固体支持物相对移动的现象。以纸电泳为例:正极负极－－－－－－－－表面带负电荷＋＋＋＋＋＋＋

5、＋带正电荷的水层携带粒子向负极移动如果样品原本是移向负极的，则泳动的速度加快；如果样品原本是移向正极的，则泳动的速度减慢。生物化学教研室朱欣婷三、区带电泳的分类（一）按支持物的物理性状不同，区带电泳可分为：1．滤纸及其它纤维(如玻璃纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯纤维薄膜)电泳2．粉末电泳：如纤维素粉、淀粉电泳；3．凝胶电泳：如琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳；4．丝线电泳：尼龙丝、人造丝电泳。生物化学教研室朱欣婷（二）按支持物的装置形式不同，区带电泳可分为：1．平板式电泳：支持物水平放置；2．垂直板式电泳：聚丙烯酰胺凝胶可做成垂

6、直板式电泳；3．垂直柱式电泳：聚丙烯酰胺盘状电泳生物化学教研室朱欣婷(三)按pH的连续性不同，区带电泳可分为：1．连续pH电泳：即整个电泳过程pH保持不变，如常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。2．非连续pH电泳：缓冲液和电泳支持物间有不同的pH的电泳，如聚丙烯酰胺凝胶盘状电脉，等电聚焦电泳等。生物化学教研室朱欣婷（二）血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳生物化学教研室朱欣婷【实验原理】1.血清中几种主要蛋白组分血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％清蛋白4.6469,00057～72α1－球蛋白5.06200,0002～5v缓冲液pH=8

7、.6vpI＜pHα2－球蛋白5.06300,0004～9血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动β－球蛋白5.1290,000～150,0006.5～12生物化学教研室朱欣婷γ－球蛋白6.85～7.3156,000～950,00012～20请预测血清蛋白电泳区带图血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带γβα2α1清蛋白生物化学教研室朱欣婷2.定量v膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带。v各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比。v可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中。v用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。生物

8、化学教研室朱欣婷3.血清蛋白电泳结果的临床意义：可能相关疾病清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白骨髓瘤↑*肾病综合症↓↑*↑*肾炎↑*↑肝硬化↓↑*急性肝坏死↓*↑↑↑↑传染性肝炎↓↑*↑*急性感染初期↑*↑*↑*慢性炎症/感染后期↑*低球蛋白血症↓*临床上还可用A/G比来表示清球蛋白的量的关系