抗中性粒细胞胞浆抗体检测在系统性红斑狼疮患者中的应用.pdf

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1、．637．第29卷第6期实验与检验医学Vo1．29No．62011年12月EXPERIMENI1ALANDLABORAT0RYMEDICINEDec．2Ol1·检验与临床·抗中性粒细胞胞浆抗体检测在系统性红斑狼疮患者中的应用张小莲，徐春晴，张聪玲，刘和平(宜春市人民医院检验科，江西宜春3：~6ooo)．摘要：目的探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)在系统性红斑狼疮fSLE)患者血清中的阳性检出率及其与病情的相关性。方法选取92例SLE患者为实验组其中包括54例活动组SIN和38例非活动组SLE．健康者18例为对照组．采用间接免疫荧光技术

2、(IIF)检测。结果92例SIE患者中，ANCA阳性22例，阳性率23．9％，其中P—ANCA阳性者21例．阳性率22．8％；C—ANCA阳性者1例，阳性率1．1％；且临床病情越重滴度越高。54例活动组SLE中ANCA阳性为17例，阳性率为31．5％。明显高于非活动组38例中的5例阳性率13．2％fP

3、号1674—1129(2011)06—0637—02doi：10．3969／i．issn．1674—1129．2011．06．023抗中性粒细胞胞浆抗体fantineutrophilcvto．涤3次，每次5min．再用荧光标记的羊抗人IgG复plasmicantibodies．ANCA)指与中性粒细胞及单核染室温孵育30min．用PBS(pH7．2)吐温缓冲液洗涤细胞胞浆中溶酶体酶发生反应的抗体当中性粒细3次。封片。最后用荧光显微镜观察结果。结果阳性胞受抗原刺激后。胞浆中的一颗粒释放蛋白酶一3、者再作1：20、1：40、1：80稀释检测

4、。结果判断：乙醇固髓过氧化物酶物质及白细胞抗原生成．刺激机体而定的抗原底物片．荧光显微镜下可见均匀分布的中产生ANCA，与临床一些炎症疾病密切相关的抗体性粒细胞．阴性时中性粒细胞胞浆部分无特异性荧自从Davies等『l1在坏死性肾小球肾炎和系统性血管光染色，细胞较暗，有时有一部分粒细胞(嗜酸性粒炎患者循环物中首先发现ANCA以来．在国际上逐细胞，嗜碱性粒细胞1出现颗粒荧光。乙醇固定的抗渐引起人们的重视。现已证实．ANCA是系统性坏死原底物片，主要表现为两种阳性荧光型别：一种是均性血管炎的血清标志抗体．被广泛应用于血管炎的匀分布在整个中心

5、粒细胞胞浆中颗粒型荧光．细胞诊断和鉴别诊断Schnabel等[21报道在SLE中仅存核无荧光称之为胞浆型ANCA(cANCA1．另一种是围在核司型ANCAfP—ANCA1，而Pauzner等[31报道在绕中性粒细胞胞核的平滑的带状荧光称之为核周型SLE中还发现存在胞浆型ANCA(C—ANCA1，本文用ANCAfpANCA1。近年来还报道一种非典型ANCA间接免疫荧光技术fIIF1对92例SLE患者作血清fX—ANGA)。同时。利用基质片中存在少量淋巴细胞ANCA的检测．以探索ANCA与SLE的关系。和嗜酸性粒细胞来区分是ANA还是真正的

6、P—AN—1材料与方法CA．前者与淋巴细胞和嗜酸性粒细胞发生反应。后1．1材料者则不能1．1．1病例选择SLE患者92例．均符合美国风湿2结果病学会1982年诊断标准。正常献血员18例。所有血2．1SLE患者中ANCA的阳性率92例SLE患者清标本置一2O℃冰箱保存备检中ANCA阳性者22例．阳性率23．9％：其中1：80稀1．1．2试剂来源ANCA阳性参考血清、荧光素标释阳性者7例．1：40稀释阳性者1O例．1：20稀释阳记的羊抗人IgG均购自德国欧蒙公司。性者5例：P—ANCA阳性者21例，C—ANCA阳性者1．1．3所用仪器电热恒

7、温水浴箱匕京东霞科学1例。正常对照组18例均为阴性。见表1。仪器厂1。荧光显微镜(日本Nikon公司)。2．2SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比1．2检测方法间接免疫荧光法fIIF1将被检血清用较92例SLE患者根据Urowitzde分类标准[41．分为PBS(pH7．2测：温缓冲液作1：10稀释，滴加于基质片活动组和非活动组。结果提示：54例活动组中AN．上，置室温孵育30min，用PBS(pH7．2)吐温缓冲液洗CA阳性率为31．5％(17／541．38例非活动组中ANCA．638·第29卷第6期实验与检验医学Vol

8、29N

9、o．62011年12月EXPERIMENTALANDIAB0RATORYMEDICINEDeC．2011表1SLE患者中ANCA的阳性率损伤．或ANCA引发T细胞介导的细胞免疫协同造成组织损伤的结果_lJ有