鸡卵黄抗体Fab’的制备及鉴定.pdf

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1、2010年2月第23卷第2期JMedPost~a，Vo1．23，No．2，February，2010·133·论著(基础研究)鸡卵黄抗体Fab的制备及鉴定邹强，李敏惠，杨淑霞，何建荣，刘阳，李腾飞，常山【摘要】目的鸡卵黄抗体(immunoglobulinY，IgY)的活性片段Fab免疫原性低，可口服用于预防胃肠道感染。文中制备并鉴定IgYFab片段。方法采用胃蛋白酶水解法制备Fab，对酶与IgY混和质量比、pH值、酶解时间进行优化；采用SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—polyacrylamidegeleleetrophoresis，SDS—P

2、AGE)及Westernblot对酶解产物进行鉴定。结果胃蛋白酶：IgY的质量比为1：40，缓冲液pH4．2，酶解时间9h的条件下，可得到无pFc片段的特异性抗体Fab片段。结论获得制备IgYFab的最佳条件，得到的Fab产量高、纯度高，特异性强，是规模化制备特异性Fab片段的良好的实验方法。[关键词】鸡卵黄抗体；酶解；Fab【中图分类号】R392．11[文献标志码】A【文章编号】1008—8199(2010)02-0133-04PreparationandidentificationofFabfragmentsfromchickeneggyol

3、kimmunoglobulinYZOUQiang，LIMin．hui，YANGShu．xia，HEJian．rong，LIUYang，LITeng—fei，CHANGShan。(1．DepartmentofImmunology，2．ExperimentCenterforScientificResearch，3．DepartmentofOrthopedics，TheFimtAffiliatedHospital，ChengduMedicalCollege，Chengdu610081，Sichuan，China)[Abstract]ObjectiveF

4、ab，theactivefragmentfromchickeneggyolkimmunoglobulinY(IgY)，ischaracterizedbylowantigenicityandcanbeusedorallytopreventgastrointestinaltractinfection．ThisstudywastopreparetheactiveFabfragmentandidentifythetargetproduct．MethodsWepreparedFabfragmentsbydigestionofthepepsin，optimi

5、zedthequality—ratioofenzymetoIgY，pHvalueandthetimeofdigestion，anddeterminedthepurityandspecificityoftheproductsbySDS—polyaerylamidegelelectro—phoresis(SDS—PAGE)andWesternblot，respectively．ResultsTheoptimalquality—ratioofpepsintoIgYwas1：40。theoptimalpHvalueofbufferwas4．2，andth

6、etimeofdigestionwas9hat37℃．ThisconditionledtocompletedigestionofthepFcfragments．1eavingonlytheFabfragments．ConclusionTheoptimalconditionwasachievedforthepreparationoftheFabfragment，underwhichhigh—yield，high—purityandhigh—specificityFabfragmentsweresuccessfullyproduced．[Keywor

7、ds]Eggyolkimmunoglobulin；Enzymolysis；Fab转移至卵黄中对子代产生具有保护性作用的抗体。0引言其结构与哺乳动物的IgG相似，性能却更加稳定，具鸡卵黄抗体(immunoglobulinofeggyolk，IgY)是有较强抵抗热、酸、碱的能力_l-2]。鸡卵黄中存在的免疫球蛋白，是由鸡血液中的IgGIgY蛋白经胃蛋白酶水解可得到分子质量更小的鸡卵黄抗体特异性片段Fab。在相同条件下，基金项目：四川省科技厅重点应用基础研究(05JY029-083)Fab的活性可保持IgY原始活性的70％以上]。作者单位：610081

8、成都，成都医学院免疫学教研室[邹强(医学博Fab还能更好地抵抗胃酸屏障，因此更适宜采用口士)]，科研实验中心(李敏惠、杨淑霞、何建荣、刘