抗MRSA-PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立.pdf

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1、96微生物学杂志2012年1月第32卷第1期JOURNALOFMICROBIOLOGYJan．2012Vo1．32No．1抗MRSA—PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立邹玖明，张爱平，李智山h(1．襄樊学院附属医院襄阳市中心医院检验科，湖北襄阳441021；2．襄阳市中心医院重症医学科，湖北襄阳441021)摘要制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球茼青霉素结合蛋白2a(MRSA．PBP2a)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)，建立检测MRSA的乳胶凝集方法。采用体外诱导的方法制备PBP2a蛋白，胸部肌肉多点注射方式免疫6只

2、海蓝蛋鸡，水稀释法提取IgY，BCA法测定蛋白含量，Westernblotting进行特异性分析，用提取的IgY抗体致敏聚苯乙烯乳胶，建立检测PBP2a的乳胶凝集方法。成功诱导并制备获得纯化的PBP2a蛋白，首次免疫后1月每枚鸡蛋提纯后可获得约48mgIgY抗体，Westernblotting结果显示IgY抗体能有效识别纯化的PBP2a蛋白；成功建立检测PBP2a的乳胶凝集法，敏感性达1mg／L。抗MRSA—PBP2a鸡卵黄抗体具有较高的敏感性和特异性，基于其建立的乳胶凝集检测方法具有较好的灵敏性。关键词青霉素结合蛋白2a；卵

3、黄免疫球蛋白；乳胶凝集中图分类号R446．5文献标识码B文章编号1005—7021(2012)O1—0096—04PreparationofChickenEggYolkAntibodiesagainstMRSA—PBP2aandtheEstablishmentofaEmulsionAgglutinationTestMethodZOUJiu．ming，ZHANGAi．ping，LIZhi．shan(1．Dept．ofLab．。Hosp．A．f~1．XiangfanCol1．，2．Dept．ofICUMed．，XmngyangCt

4、r．Hosp．Xiangyang441021)AbstractInordertopreparechickeneggyolkimmunoglobulin(IgY)againstmethieillinresistantStaphylococcusnⅡ一rel~penicillinbindingprotein2a(MRSA—PBP2a)andtoestablishaemulsionagglutinationtest(EAT)methodtode—tectMRSA．ThePBP2awaspreparedadoptinginductio

5、nvitrobyimmunizingsixseabluelayersintramuscularmulti—pointedinjectionontheirbreasts．AndtheIgYwasextractedwithwater—dilutionmethod；theproteincontentwasmeasuredbyBCAmethod，andanatyzedbyWesternblottingtoevaluatethespecificity：Polystyreneemulsionwassen-sitizedwiththeext

6、ractedIgYantibodytoestablishEATmethodtodetectPBP2a．TheresultsshowedthatthePBP2awasinducedsuccessfully．Approximately48mgIgYwasextracted，obtained，andpurifiedfromeacheggonemonthafterthefirstimmunization．TheresultsofWesternblottingdemonstratedthattheIgYantibodycouldbeef

7、ectivelyrecognizedPBP2a．ThesensitivityofthesuccessfullyestablishedPBP2aEATmethodwasashighas1mg／L．There—fore，chickeneggyolkimmunoglobulinIgYagainstMRSA·PBP2apossessedfairlyhighspecificityandsensitivity，andEATmethodbasedonitpossessedfinesensitivity．Keywordspenicillinb

8、indingprotein2a；eggyolkimmunoglobulin；emulsionagglutination鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin，物学特性等方面已研究得较清楚，并且作为诊断IgY)是鸡血液中IgG抗体选择性转移到卵黄中形试剂和