基于M蛋白检测犬瘟热抗体ELISA方法的建立.pdf

《基于M蛋白检测犬瘟热抗体ELISA方法的建立.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、，蚕鍪_啊Onlines燎艘戴■凝燃謦～0nlines麓ystem：http：／／ww茹w．jabiotech．orggy昂i‰踞一-圈嫩卺蒜露裁：==基于M蛋白检测犬瘟热抗体ELISA方法的建立张敏黄京书娄亚萍赵阿勇王晓杜1浙江农林大学动物科技学院，杭州311300；2湖北省畜牧兽医局，武汉430070通信作者，zay503@163．com；xiaoduwang@163．tom摘要犬瘟热病毒(Caninedisrempervirus，CDV)是导致犬科等多种属动物发热、腹泻、幼仔死亡等症状的传染病病原体

2、，建立针对CDV的快速灵敏的诊断方法对于该病的防治具有重要意义。本研究利用RT-PCR方法扩增得到CDV-M基因，构建原核重组表达载体pET-28(a)一CDV-M，并在大肠杆菌(Escherichiacoli)@实现了该蛋白的表达和纯化，Westemblot验证重组蛋白的抗原性，用纯化的重组蛋白his—CDV-M作为抗原包被酶标板，ELISA方阵实验确定该重组蛋白的包被浓度，建立了检测临床犬血清样品的CDV-M蛋白抗体的间接ELISA方法，比较本实验方法与其他试剂盒之间的特异性和灵敏性。结果表明重组蛋白

3、his．CDV-M得到较好表达，纯化后蛋白浓度为2．840megmL。Westernblot结果表明重组抗原能与犬瘟热阳性血清进行反应。方阵实验确定抗原最佳工作浓度为8．88Ixg／mL，抗体最佳稀释度为1：160，应用本方法检测223份犬血清样品，与进口CDV诊断试剂盒检测结果符合率为96％。本研究建立的基于M蛋白的犬瘟热病毒抗体检测方法具有较高的特异性和灵敏性，为犬瘟热病毒的诊断及M蛋白的功能研究提供了工具。关键词犬瘟热病毒(CDV)，重组M蛋白，原核表达，间接ELISAEstablishmentof

4、anIndirectELISABasedonMatrixProteinofCaninedistempervirusZHANGMinHUANGJing—ShuLOUYa—PingZHAOA—Yong’ⅥNGXiao—Du1CollegeofAnimalScienceandTechnology,Zh~iangAgricultureandForestryUniversity,Hangzhou311300，China；2AnimalHusbandryandVeterinaryBureauofHubeiProvin

5、ce，Wuhan430070，ChinaCorrespondingauthors，zay503@163．com；xiaoduwang@163．GomAbstractCaninedistempervirus(CDV)，whichcausesfever,diarrhea，evendeathofCanidaeandotheranimals，isapathogenhazardsofinfectiousdiseases．Itisimportanttodiagnosisandcontroldiseasesusingr

6、apidandsensitivemethodofdetectingCDV．Inthework，MgeneofCDVwasclonedbvIPCRfromcDNAofclininalsamples．TheplasmidofpET-28(a)一CMwasconstuctedandidentifiedbvPCRandrestricttionendonucleasesdigestion．TherecombinantproteinCDV-MwereexpressedinEscherichiacolbvIPTGind

7、uction．TheantigenicityofCDV-MwereidentifiedbvWestemblot．Thepurifiedrecombinantproteinhis—CDV-Mwerecoatedasantigen，theoptimalproteincoatingconcentrationwasdeterminedbyELISAsquaretests．TheindirectELISAmethodforCDV-Mantibodywasestablishedandapplifiedtodetect

8、ionofclinicalcanineserumsamples．Thespecificityandsensitivitywerecompletedbycomparisontestsofthistestmethodandotherkits：TheCDV-MwereexpressedinEcolBL21(DE3)．Thepurifiedproteinconcentrationwas2．840mg／mL．Squaretestshow