禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定.pdf

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1、第29卷第4期北京农学院学报Vo1．29，NO．42Ol4年l0月JOURNAIOFBEIJINGUNIVERSITYOFAGRICULTUREOct．，2014禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定李子璇。，韦莉，王菁，朱姗姗，张春燕，柳舒航，全荣。，阎旭，陈武，刘爵。(1．北京农学院动物科学技术学院，北京102206；2北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京100097)摘要：利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒c型核衣壳N蛋白进行表达，并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFPC1中，

2、构建重组真核表达载体，然后将阳性重组质粒转染BHK一2l细胞，通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检测N蛋白的表达，并用Westernblot检测表达蛋白的抗原性。结果显示，禽偏肺病毒核衣壳N蛋白主要表达在细胞浆中，在转染后48h后表达量最高；与抗N蛋白抗体有抗原性，所表达核衣壳N融合蛋白大小为72kDa左右，与预期结果一致。结论，本试验成功应用哺乳动物表达系统表达了禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白，表达蛋白具有抗原性，为与禽偏肺病毒核衣壳N蛋白的相关研究奠定了基础。关键词：禽偏肺病毒核衣壳N蛋白；哺乳动物细胞表达系统；显微镜观察；Western

3、blotting中图分类号：$851．2网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／l1．2156．S．20140530．2022．001．html文章编号：1002-3186(2014)04-0049-05文献标志码：Adoi：10．13473／j．cnki．issn．1002—3186．2014．0083Mammalianexpressionandidentificati0nofavianmetapneumovirussubgroupCnucleocapsidproteinLIZixuan～，WEI

4、Li，WANGJing，ZHUShanshan，ZHANGChunyan。，LIUShuhang，QUANRong，YANXu，CHENWu，LIUJue(1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，BeijingUniversityofAgriculture，Beijing102206，China；2．InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，BeijingAcademyofAgricultureandForestrySciences，Beijing

5、100097，China)Abstract：TheaimsofthispaperweretoexpresssubgroupCavianmetapneumovirusvirus(aMPV)nucleocapsid(N)proteinbyEukaryoticexpressionsystemandtofurtheranalyzetheantigenicityoftherecombinantprotein．TheNgenewasclonedintoeukaryoticexpressionpEGFP-C1vectortoobtainthereco

6、mbinantexpressionvector．ThepositiverecombinantexpressionvectorwastransfectedintoBHK-21cells．TherecombinantNproteinexpres—sionwasanalyzedbyconfocalmicroscopyandinvertedfluorescencemicroscopeandtheantigenicityoftherecombi—nantproteinbywestern-blotting．Theresultsdemonstrate

7、dthattheNproteinexpressedmainlyinthecytoplasmandexhibitedaspecificandsinglebandwithasizeofabout72kDawhenreactedwithamonoclonalantibodyraisedagainstsubgroupCaMPVNprotein．Inconclusion，thisstudyexpressedaMPVNproteininmammalianexpres—sionsystemwithagoodantigenicity，whichmade

8、thefoundationworkfortherelatiedstudyofaMPVNprotein．Keywords：avianmetapneumovirusnucleocapsid(N)protein；