稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(12)：134—139JournalofHenanAgriculturalSciences稳定表达靶向BVDVshRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响范璐，王丽，史西保，樊剑鸣。，王爱萍，张改平(1．河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室／河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；2．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；3．郑州大学公共卫生学院，河南郑州450001；4．郑州大学生物工程系，河南郑州450001；5．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对B

2、VDV复制的影响，利用脂质体介导法将B、，shRNA真核表达质粒pSGH1～sh1083和pSGH1一sh8235及对照质粒pSGHl转染MDBK细胞，通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDVshRNA单克隆细胞系subclonepSGH1—1083和subclonepSGH1—8235及对照细胞系subclonepshmock。通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID。及RT—PCR、流式细胞术检测BVDVshRNA细胞系对BVDV复制的影响。结果表明，与阴性对照组相比，单克隆细胞系subclonepSGH1—1083和subclonepSGH1—8235的细胞在感染BV

3、DV72h后CPE不明显，其TCID5。低于阴性对照组；RT—PCR结果显示，单克隆细胞系sub—clonepSGH1—1083和subclonepSGH1—8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱；流式细胞术检测不同细胞系接毒24h后的结合率，单克隆细胞系subclonepSGH1—1083和sub—clonepSGH1—8235与病毒结合率分别为l1．37和11．51，与对照组(2O．25)相比有所降低。综上，稳定转染BVDVshRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1—1083和subclonepSGH1—8235对BVDV的复制具有抑制作用。关键词：RNA干扰

4、；牛病毒性腹泻病毒；短发夹RNA；单克隆细胞系；复制中图分类号：$855．3文献标志码：A文章编号：1004—3268(2014)12—0134—06EstablishmentofStableCellLineExpressingshRNATargetingBVDVandItsEffectontheReplicationofBVDVFANLu，WANGLi，SHIXi—bao，FANJian-ming。，WANGAi—ping，ZHANGGai—ping(1．KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculture／HenanPr

5、ovincialKeyLaboratoryofAnimalImmunology，HenanAcademyofAgriculturalSciences，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofLifeSciences，HenanNormalUniversity，Xinxiang453007，China；3．SchoolofPublicHealth，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China；4．DepartmentofBioengineering，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，Ch

6、ina；5．CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：InordertOstudytheeffectsofshRNAtargetingBVDVonBVDVreplication，thepSGH1一sh1083，pSGH1一Sh8235andthecontrolvectorweretransfectedintoMDBKcellby收稿日期：2014—07—12基金项目：国家自然科学基金项目(31302073)；河南省农业科

7、学院自主创新专项基金项目(2013zz48)作者简介：范璐(1986一)，女，上海崇明人，在读硕士研究生，研究方向：动物病毒分子致病机制。E—mail：632038636@qq．com*通讯作者：张改平(1960一)，男，河南内黄人，研究员，中国工程院院士，博士，主要从事动物免疫学与动物疫病快速诊断研究。E—mail：zhanggaiping2OO3@163．com第12期范璐等：稳定表达靶向BVDVshRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影