水通道蛋白－9表达载体的构建及视神经脊髓炎患者血清中抗体的检测.pdf

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1、广东医学2015年3月第36卷第6期GuangdongMedicalJournalMar．2015，Vo1．36，No．6·821·酾水通道蛋白一9表达载体的构建及视神经脊髓炎患者血清中抗体的检测高聪，郑扬波，单福兰，范永祥，吴林展，钟容，龙友明广州医科大学附属第二医院神经内科、广州医科大学附属第二医院神经科学研究所(广州510260)【摘要】目的构建一种能稳定表达人水通道蛋白一9(AQP9)的真核细胞载体，并检测视神经脊髓炎(NMO)患者血清中的AQP9抗体。方法将人AQP9基因克隆入pcDNA3．1+质粒中构建AQP9一pcDNA3．1+载体，并转染HEK

2、一293T细胞中。AQP9蛋白的表达通过RT—PCR和Westernblot法验证。通过间接免疫荧光法检测NMO患者血清中的AQP9抗体。结果AQP9的mRNA相对表达量明显高于空载体，且蛋白表达量在32kD条带附近明显高于空载和293T细胞。在4例NMO患者血清中均检测到AQP9抗体，1例脑梗死和1例健康人中抗体均为阴性。结论这种转染表达AQP9的细胞模式相对简捷，可用来检测NMO患者中的AQP9抗体，对NMO研究有一定意义。【关键词】水通道蛋白一9；抗体；视神经脊髓炎Constructionofaquaporin—-9expressingvectorand

3、detectionofAQP—_9antibodyinpatientswithneuromyelitisoptica．GAO(Song，ZHENGYang—bo，SHANFu—lan，FANYong—xiang，WULin—zhan，ZHONGRong，LONGYou—ruing．DepartmentofNeurology，TheSecondAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou510260，China【Abstract】ObjectiveToconstructaeukaryoticaq

4、uaporin一9(AQP9)expressingvectorforAQP9antibodyde—tectioninpatientswithneuromyelitisoptiea(NMO)．MethodsTherecombinantvectorwasconstructedbysubcloninghumanAQP9cDNAintopcDNA3．1+vector，withwhichhumanembryonickidney(HEK)293TcellswastransfeetedtoestablishanAQP9proteinexpressingcellline．Th

5、ecelllineexpressionAQP9wasconfirmedbyreversetranscriptionpoly—merasechainreaction(RT—PCR)andWesternblotanalysis．Serumantibodywastestedwithcell—basedassaybyindi—rectimmun0nuorescenceassay．ResultsTherelativeexpressionlevelofAQP9mRNAwassignificantlyhigherthantheemptyvector，andWesternbl

6、ottinganalysisshowedtheexpressioncontentat32kDbandswassignificantlyhigherthantheemptyvectorand293Tcells．ThecelllineexpressingAQrVwassuccessfullyconstructedandconfirmedbyreversetran—scriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR)andWesternblotanalysis．Theserlmantibodywaspositiveinall4pa·tie

7、ntswithNMOandnegativeinonewithcerebralinfarctionandonenormaladult．ConclusionThetransfectedcellrood—elissimpleandadvantageousinAQP9serumantibodydetectionforresearchonNMO．【Keywords】Aquaporin一9；neuromyelitisoptica；HEK293T；antibody视神经脊髓炎(neuromyditisoptiea，NMO)，是一种在抗AQP9抗体。目前尚未见体外检测人AQP

8、9抗体自身免疫性介导的神经髓鞘脱失和坏