新城疫病毒ClassⅠ强毒株HN单克隆抗体的研制及免疫学反应.pdf

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1、464ISSN1007—8738志(ChinJCellMolImmunoI)2010．26(5·论著·文章编号：1007—8738(2010)05—0464一O3新城疫病毒ClassI强毒株HN单克隆抗体的研制及免疫学反应孙英杰，陈鸿军，宋翠萍，于洋，仇旭升，于圣青，丁铲(中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241)Preparationofmonoclonalantibodiesa·新城疫病毒(newcastlediseasevirus，NDV)是副黏病毒科一禽腮腺炎病毒属惟一成员，可以感染200gainstHNproteinofClass

2、INewcastle余种禽类、鸟类和其他动物，一直是危害世界养禽业diseasevirusvirulentstrain的最主要病患之一。根据系统发育进化树分析可将不同基因组长度的NDV病毒分为两个群，即ClassISUNYing-jie，CHENHong-jun，SONGCui-ping，(15198nt)和ClasslI(15192nt或15186nt)-2]。目y，Xu—sheng，YUSheng—qing，DINGChan前已报道的大多数强毒分离株均属于ClasslI，而shangh=VeterinaryResearchInstitute，

3、ChineseAcademyofAgri—culturalSciences，Shanghai200241，ChinaClassI中大部分是低致病力的弱毒株(1oNDV)或无毒株，这些loNDV普遍存在于各种家禽和野鸟体内，[Abstract]AIM：Topreparemonoclonalantibodies因为NDV仅有一种血清型，因此，这些毒株与强毒(mAb)againstHNproteinofClassINewcasltediseasevi-株在血清学上根本无法区分。也正是由于ClassInJs．METHODS：Several6-week-o

4、ldmicewereimmunized毒株宿主具有高度迁徙的特点，极易导致NDV由野withClassI9a5bvimlentstrain．Hemagglutinationinhibition鸟或水禽向家禽中转移，进而演化为临床致病性强(H1)，indirectimmunofluorescenceassay(IFA)，cellneu-毒J。Shengqing等研究发现1株从野生水禽分离tralizationtest．ELISAandWestemblotanalysiswereusedtocharacterizeandidentifythesean

5、tibodies．RESULTS：到的非致病性NDV毒株，但当该病毒在SPF鸡体内Fourhybddomacelllinesweresuccessfullyprepared，des—经过9次气囊接种(9a)和5次脑内接种(5b)传代ignatedasmAb2F5，2F12，3H7and31-19．Amongthem，on—后，演变为速发型NDV，从而证实NDV弱毒株可以IymAb31-17and31-19recognizedHNproteinoftheClassI在鸡体内经传代后发生毒力变异。strain，specificallyneutrali

6、zingNDVandinhibitinghemagglu—我们以NDVClassI强毒株9a5b尿囊液为免疫tination．CONCLUSIoN：mAb3H7and3H9couldbeofuse原，制备获得4株针对HN的特异性单克隆抗体inidentificationofClassIandClassIIstrains．andinfunc·(mAb)，利用间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制试tionaIstudiesofHNandcelIreceptorsforNDV．验(HI)进行检测，结果发现：3H7和3H9株仅与[Keywords]New

7、castle-diseasevirus；classI；virulentNDVClass1分离株反应。此mAb的成功制备，使strain；HN；monoclonaIantibodiesNDVClassI、Ⅱ毒株的血清学鉴定带来了极大的便[摘要]目的：制备抗新城疫病毒(NDV)ClassI强毒分离利，并为NDVHN功能及受体学研究奠定了基础。株9a5b的单克隆抗体。方法：以9a5b尿囊液为免疫原，接种6周龄BALB／c小鼠，以血凝抑制(HI)和间接免疫荧光(IFA)1材料和方法检测所获得的mAb。结果：成功制备获得NDV血凝素(HN)1．1病毒16代

8、NDV分离株由本室保存。从1只已迁徙到特异性mAb4株。免疫特性鉴定表明：在这4株mAb中，阿拉斯加的野生水禽体内分离得到1株NDV无毒