小鼠骨形成蛋白BMP3的原核表达及多克隆抗体制备与鉴定.pdf

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1、华北农学报·2015，30(3)：8—13小鼠骨形成蛋白BMP3的原核表达及多克隆抗体制备与鉴定刘祥(陕西理工学院生物科学与工程学院，陕西汉中723001)摘要：为构建小鼠BMP3蛋白原核表达载体，纯化BMP3蛋白，制备并鉴定BMP3蛋白小鼠多克隆抗体，以及对BMP3进行系统进化关系研究。采用RT—PCR方法从小鼠肝脏中克隆获得BMP3蛋白的表达菌株；利用SDS．PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得BMP3蛋白，免疫小鼠制备BMP3蛋白多克隆抗体；采用ELISA法检测抗体滴度达1：3200倍，WesternBlotting证实抗血清具有很

2、好的特异性。通过DNAMAN软件对BMP3序列同源性分析发现其C。端在不同动物间存在较高同源性；MEGA软件对BMP3序列的系统发生分析证实BMP3在动物间具有明显的进化趋势。为BMP3蛋白调控骨代谢及与肿瘤的关系研究奠定基础。关键词：BMP3蛋白；RT—PCR；多克隆抗体；ELISA；WesternBlotting中图分类号：R392文献标识码：A文章编号：1000—7091(2015)03—0008—06dol：10．7668／hbnxb．2015．03．002ProkaryoticExpression，PolyclonalAntibo

3、dyPreparationandIdentification0fMouseBMP3ProteinLIUXiang(CollegeofBiologicalSciencesandEngineering，ShaanxiUniversityofTechnology，Hanzhong723001，China)Abstract：Toconstructprokaryoticexpressionvectorofmousebonemorphogenicprotein3(BMP3)，preparethepolyclonalantibodiesofmousean

4、ti—BMP3，andmakeastudyonthephylogeneticrelationshipsofBMP3protein．TheBMP3expressionstrainwasobtainedfrommouseliverbyRT-PCRandmolecularclone；BMP3waspurifiedbythewayofSDS-PAGEgelslices，renaturedbyureagradient，andimmunizedmicetopreparethepolyclonalantibod—Y．BMP3antibodytiterwa

5、s1：3200byELISA；andWesternBlottingprovedthattheantiserumhadgoodspecificity．BMP3homologyanalysisfoundthattheC-terminalhadhighhomologyindifferentanimalbyDNAMANsoftware；BMP3sequencephylogeneticanalysisshowedthattheanimalevolutiontrendwasdifferentbyMEGAsoftware．Theseworkslaidth

6、egroundworkforthefunctionofBMP3regulatedbonemetabolismandtherelationshipbetweenBMP3andtumor．Keywords：BMP3protein；RT—PCR；Polyclonalantibody；ELISA；WesternBlottingBMP3属于转化生长因子．B(TGF-p)超家族蛋根的发育起到调控作用。此外，BMP3也是一白¨，活性部位由c端的约100多个氨基酸组成；种肿瘤抑制因子，其活性丧失与甲状腺乳头状其mRNA主要分布于神经外胚层来源的组织及细癌、

7、胆管癌⋯的发生发展有关。胞，而BMP3蛋白富含于中胚层来源的组织。目本试验利用分子克隆方法获得小鼠BMP3蛋白前，在心脏、肾脏、肺、肝脏，以及神经系统等组织均原核表达菌株；纯化、复性BMP3蛋白，免疫小鼠，制发现有BMP3表达。。BMP3对骨骼的生长发育、备小鼠多克隆抗体。为BMP3蛋白参与骨代谢、调修复具有重要作用；并对生殖、胎儿发育，以及牙控生殖与胎儿发育，以及肿瘤的研究奠定基础。收稿日期：2015—03—05基金项目：陕西省教育厅科学研究计划项目(2013JK0723)；陕西理工学院人才启动项目(SLGQD13-15)作者简介：刘祥(

8、1983一)，男，安徽合肥人，讲9币，博士，主要从事蛋白质组学与免疫学研究。3期刘祥：小鼠骨形成蛋白BMP3的原核表迭及多克隆抗体制备与鉴定9切后，利用T4-连接酶连接，转化E．