酪胺生物转化生成章鱼胺的研究.pdf

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1、天然产物研究与开发NatProdResDev2013，25：81-85文章编号：1001-6880(2013lSuppl-0081-05酪胺生物转化生成章鱼胺的研究曲映红，刘志东2，陈舜胜’上海海洋大学上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海201306；中国水产科学研究院东海水产研究所，上海200090摘要：本研究以酪胺为原料，用高速冷冻离心机提取含有细胞色素P450的草鱼肝脏S-9部位并以之为酶源，以维生素C为氢载体，异烟肼为单胺氧化酶抑制剂，生物转化生成章鱼胺。提取得到的S-9部位冷藏在4oC条件下，其中的细胞色素P450活性只能保持4h左右，而-25oC冷藏条件下其活性可保持8

2、—10d。生物合成实验的结果显示氢载体对生物合成章鱼胺是必需的，反应1h产生的章鱼胺为879．7／xg／4．5mL反应液。这表明以草鱼肝脏S-9部位为酶源生物合成章鱼胺是可行的。关键词：草鱼肝S-9部位；细胞色素P450(CYP450)；章鱼胺；酪胺中图分类号：Q814．9文献标识码：AStudyontheBioconversionfromTyramingtoOctopamineQuYing．hong，LIUZhi．dong。，CHENShun—sheng。ShanghaiOceanUnive~iq，ShanghaiEngineeringResearchCenterofAquatic—P

3、roductProcessing＆Preservation，Shanghai201306，China；：EastChinaSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Shanghai200090，ChinaAbstract：Inthisstudy，hepaticS-9placecontmningcytochrome450intheliverofGrassCarpwa$extractedbyahighspeedrefreigeratedcontrifuge．WhenthehepaticS-9placewasst

4、oredat4℃，thecytochmmP450activitycanonlykeepabout4h．whileitcanbemaintainedfor8-10daysat-25℃．TyraminewasbioeonvertedtooctopaminethGrassCarphepaticS-9placeastheresourceofcytochromeP450，aseorbicacidashydrogencarrierandisoniazidasmonoamineoxi-daseinhibitor．Theresultsshowedthathydrogencarrierisnecessar

5、yforthebiothesynsisofoctopamine，andtheoctopam-ineobtainedafter1hcatalysisWas879．66txgin4．5mLreactionliquid．ThisindicatedthatitisfeasibletoproduceOC·topaminewhenhepaticS-9placeofGrassCarpbeingtakenasresourceofenzyme．Keywords：grasscarphepaticS-9place；cytoehromeP450(CYP450)；oetopamine；tyramine酪氨酸在体内

6、经芳香族氨基酸脱羧酶作用生成可行性。酪胺，再经细胞色素P450(CYP450)酶系JB一羟化酶1材料与方法的作用生成章鱼胺¨。CYP450酶系在动植物中广泛分布，在鱼类中主要分布于肝、肾、肺和鳃L3J，1．1试剂国内已有关于草鱼肝CYP450的研究报道J。在测牛血清白蛋白(99％)、1，4一二硫苏糖醇(DTr)、定CYP450的含量或活性时，通常先用肝匀浆制备一苯甲磺酰氟(PMSF)(99％)购于华美生物工程公S-9部分，再从中提取微粒体，然后应用CO还原差司。异烟肼由上海医药集团信谊药厂提供。其它试示光谱法进行剂均为国产分析纯。测定。但提取微粒体时要使用100，000Xg的生理盐水(0

7、．9％氯化钠溶液)超速冷冻离心机，本研究中为简化生产条件，仅用0．1mo]／LTris．HC1缓冲液(含1．15％KC1，pI-I7．4)10，000Xg的高速冷冻离心机提取了草鱼肝的S-9磷酸盐缓冲液：0．2mol／LNa2HPO4：0．2mol／L部分，并以它作为CYP450酶源，以章鱼胺的前体化NaH2PO4：H20=36：14：50，最终浓度为0．1mol／L，合物酪胺为原料，研究了经催化反应生成章鱼胺的pH=7．5磷酸盐匀