间歇性低氧对肝细胞脂代谢的影响及其可能机制.pdf

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1、中华肝脏病杂志2014年5月第22卷第5期ChinJHepatol，May2014，Vo1．22，No．5·369·间歇性低氧对肝细胞脂代谢的影响及其可能机制孙中新沈薇【摘要】目的探讨间歇性低氧对肝细胞脂质代谢的影响及其机制。方法利用三气培养箱(O2、CO2、N2体积分数分别为2％、5％、93％)8h／d间歇性低氧处理L02和HepG2细胞1、2、3、4、5d，建立间歇性低氧细胞模型，油红O染色及甘油三酯(TG)测定检测肝细胞内的脂滴含量，流式细胞仪及荧光显微镜观察间歇『生低氧对肝细胞内活性氧(ROS)的影响，W~~rnblot检测ROS对低氧诱导因子(HI

2、F)-1o【和HIF-2GC蛋白表达的调节，Westemblot检测HIF-10【下游与脂质代谢相关的固醇调节元件结合蛋白一lc(SREBP-lc)、脂肪酸合成蛋白(FAS)、脂肪分化相关蛋白(ADFP)的表达。各组TG含量测定行2X5的析因方差分析，两个样本均数比较用t检验，多个样本均数的比较用单因素多样本方差分析，多个样本间的两两比较用口检验。结果实验组L02和HepG2细胞内油红O染色可见橘红色脂滴增多并出现融合现象，TG含量随着间歇性低氧天数的增加逐渐增多m=61．83，印G2=104．19，尸值均<0．01)，氧浓度与时间有交互效应，差异有统计学意

3、义垃=39．50，IeDG2=76．39，尸值均<0．01)。ROS在对照组荧光显微镜下可见有基础表达，与对照组比较，间歇l生低氧处理第2天，肝细胞内ROS荧光指数明显增加，差异有统计学意义(0．703±0．129与3．31土0．198，垃=22．0637l0．617士0．156与2．33±0．42，eDG2：7．2003，尸值均<0．05)，随着间歇性低氧处理时间延长，L02和HepG2细胞内ROS的含量增多m=1021．84，晶eDG2=49．89，尸值均<0．01)。W~~temblot结果显示，实验组HIF-Io【、SREBP-lc、FAS和ADFP

4、蛋白相对表达量较对照组增加，并且随时间的延长逐渐增多，差异有统计学意义(L02细胞：IF_：371．19，啪P_l。=204．49，_AS=38．2，DFP=154．31，P值均<0．05；HepG2细胞：IF_l=150．84，IREBP_Ic=107．35，AS=279．71，=352．06，JP值均<0．01)，HIF_20【蛋白相对表达量在实验组第1d较对照组增多(成=20．76，fHeDG2=3．82，P值均<0．05)，此后逐渐降低至第4d低于对照组(m=3．18，瞄：=2．54，P值均

5、因子和脂肪分化相关蛋白的表达，通过HIF-1o【—sREBP_1c___FAs和ADFP途径导致肝细胞脂代谢异常。【关键词】肝细胞；脂代谢障碍；细胞低氧，间歇陛，活陛氧，低氧诱导因子Efectofintermittenthypo~daonlipidmetabolisminlivercellsandtheunderlyingmechanismSunZhongrin,ShenWei．DepartmentofGastroentropy,theSecondAfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversi~Chongqing400

6、010,ChinaCorrespondingauthor：ShenWei,Emaikshenwei315@126．com[AbstraalObjectiveTodeterminetheefectofintermittenthypoxiaonlipidmetabolisminlivercellsandtoexplorethepossiblemolecularpathwaysinvolvedinthisprocess．MethodsAnintermi~enthypoxiacellmodelsystemwasestablishedbyincubatingthehu

7、manhepaticcelllinesL02andHepG2inanatmosphereof2％02，5％CO2and93％N2for8hoursperdayoveraperiodofI，2，3，4or5days．Cellsculturedinnormoxiaconditions(21％O2)servedascontrols．Changesinintracellularlipiddropletsandtriglyceride(TG)levelswereassessedbybiochemicalassaysandoilredstaining．Changesin

8、intracellularreactiveoxyge