蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因Pcrace2的克隆及序列与表达分析.pdf

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1、2013，39(3)：0460—0466ISSN0257—4799：CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．cn蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因Pcrace2的克隆及序列与表达分析刘娟张月华张华光高丽钱荷英孙平江徐安英’(江苏科技大学，江苏镇江212003；中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江212018)摘要昆虫乙酰胆碱酯酶(acetyleholinesterase，AChE，EC3．1．1．7)是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标。利用RT。PCR和RACE技术从蓖麻蚕(Philosamiacynthiaricini)幼虫头部组织克隆了乙

2、酰胆碱酯酶基因Pcrace2。该基因cDNA全长为2O5lbp，包含l497bp的ORF，编码498个氨基酸，蛋白质的分子质量为56．25kD，等电点(pI)为5．11，含有由23个氨基酸组成的前体信号肽，推测为分泌型蛋白质。基于PcrAChE2同源氨基酸序列的系统进化分析表明：蓖麻蚕与小菜蛾(Plutellaxylostella)、棉铃虫(Helicoverpaarm@era)、烟青虫(ttelicoverpaassulta)的亲缘关系最近，与家蚕(Bombyxmori)和野桑蚕(Bombyxmandarina)的亲缘关系也比较近。利用Rea1．timePCR方法分析P

3、crace2基因在蓖麻蚕5龄第3天幼虫的头部、脂肪体、丝腺、中肠和血液中均有表达，以头部的表达量最高；在蓖麻蚕不同发育时期，Pcrace2在蛾期的表达量明显高于其它发育时期，在5龄幼虫期的表达量最低。研究结果有助于进一步分析蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因的功能。关键词蓖麻蚕；乙酰胆碱酯酶；基因克隆；序列特征；表达谱；实时定量PCR中图分类号$885．2；Q78文献标识码A文章编号0257—4799(2013)03—0460—07MolecularCloning，SequenceFeatureandExpressionPatternofAcetylcholinesteraseGen

4、efrOmPhilosamiacynthiariciniLIUJuan，ZHANGYue．Hua’，ZHANGHua．Guang’GAOLi’QIANHe—YingSUNPing—JiangXUAn—Ying，(JiangsuUniversityofScienceandTechnology，ZhenjiangJiangsu212003，China；TheSericulturalResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，ZhenjiangJiangsu212018，China)AbstractInsecta

5、cetyIchoIinesterase(AChE，EC3．11．7)isthetargetof0rgan0phosphorusandcarbamateinsecti—cidesAneri—silkwormfPhilosamiacynth『a，『c／nf)acetylcho1inesterasegenePcrace2wasclonedfrOmheadtissueoferi—silkwormlarvabymeansofRT—PCRandRACEFull—lengthcDNAofthisgeneis2051bplongwithanORFof1497bDthatencodes49

6、8aminoacids．Theencodedproteinispredictedtohaveamolecularweightof56．25kDandPlof511．Theproteinhasasignalpeptideprecursorof23aminoacidsandispredictedtobeasecretoryproteinPhylogenetica—nalysisbasedonhomologousaminoacidsequencesshowedthatPhilosamiacynth

7、aric／nisharedtheclosestgeneticre—lations

8、hipwithPIute／／axylostela．Helicoverpaam1igeraandHelicoverpaassulta．＼talsohadclosegeneticrelationshipwithBombyxmoriandBombyxmandarina．Real-timePCRanalysisshowedthatPcrace2genewasexpressedinhead，fatbody，silkgland，midgutandhemolymphofday3eri—silkwormlarvaeofthe5thinstar