蓖麻蚕ago1蛋白基因的克隆及序列与表达特征

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1、ScienceofSericulture蚕业科学2014，40(5):0824－0829ISSN0257－4799;CN32－1115/SE-mail:CYKE@chinajournal．net．cn蓖麻蚕AGO1蛋白基因的克隆及序列与表达特征11，21，211，21，21，2何庆玲张月华钱荷英罗旭芳李刚孙平江徐安英12(江苏科技大学，江苏镇江212003;中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江212018)摘要小ＲNA介导的基因表达沉默机制在昆虫中非常保守。作为ＲNA诱导沉默复合体(ＲISC)的关键组分，Argonaute(AGO)蛋白家族成员在ＲNA干扰途径中起着关键性作用。以蓖麻蚕(Ph

2、ilosamiacynthiaricini)品种海蓝的幼虫头部cDNA为模板，利用ＲT-PCＲ和ＲACE技术克隆了一个编码AGO蛋白的基因，将该基因命名为pcr-AGO1(GenBank登录号:KJ676101)。该基因cDNA全长3490bp，包括182bp的5'-UTＲ和572bp的3'-UTＲ，OＲF为2736bp，编码911个氨基酸，蛋白质分子质量为101.4923kD，等电点为9.31，蛋白质序列中含有AGO家族成员典型的PAZ结构域和PIWI结构域。实时荧光定量PCＲ检测pcr-AGO1基因在蓖麻蚕的幼虫期、蛹期、蛾期和卵期以及幼虫的头部、脂肪体、表皮、丝腺、中肠和血液等组织器

3、官中均有表达。其中，在卵期的表达量最高，幼虫期最低，并且在除蚁蚕外的整个幼虫期的表达量没有太大变化;在幼虫各个组织中的表达量以表皮最高，中肠次之，在血液和头部的表达量都较低。研究结果提示，该基因可能在蓖麻蚕的整个发育期都发挥相应的功能，并可能参与幼虫表皮细胞的生长调控。关键词蓖麻蚕;AGO家族蛋白;基因克隆;序列特征;表达谱;实时荧光定量PCＲ中图分类号S885.2;Q786文献标识码A文章编号0257－4799(2014)05－0824－06DOI:10.13441/j.cnki.cykx.2014.05.010Cloning，SequenceFeatureandExpressionPa

4、tternofArgonauteGene1fromPhi-losamiacynthiaricini11，21，211，21，2HEQing-LingZHANGYue-HuaQIANHe-YingLUOXu-FangLIGangSUNPing-Jiang1，2*XUAn-Ying12(JiangsuUniversityofScienceandTechnology，ZhenjiangJiangsu212003，China;TheSericulturalＲesearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，ZhenjiangJiangsu2

5、12018，China)AbstractSilencingofgeneexpressionmediatedbysmallＲNAisaconservedmechanismininsects．Asthecorecom-ponentofＲNA-inducedsilencingcomplex(ＲISC)，theArgonaute(AGO)familyproteinsplayacrucialroleinＲNAinter-ference(ＲNAi)pathway．Aneri-silkworm(Philosamiacynthiaricini)Argonautefamilygenewasclonedusi

6、ngcDNAfromlarvalheadoferi-silkwormvarietyHailanastemplatebymeansofＲT-PCＲandＲACE，andwasnamedpcr-AGO1(Gen-BankaccessionNo．KJ676101)．FulllengthcDNAofthisgenewas3490bp，including182bp5'-UTＲand572bp3'-UTＲ．ItsOＲFwas2736bpandencodedaproteinof911aminoacidswithmolecularweightof101.4923kDandisoe-lectricpoint

7、of9.31．ThededucedproteincontainedtwotypicalconserveddomainsoftheAGOfamily，i．e．PAZandPIWIdomains．FluorescentquantitativePCＲrevealedthatpcr-AGO1genewasexpressedinvariousdevelopmentalsta-gesoferi-silkwormincludingla