高效液相色谱的基础知识.ppt

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1、高效液相色谱的基础知识1高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱法的特点高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：高效液相色谱法的特点1．高效液相色谱法与经典液相色谱

2、法高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达103cm·min-1.例如对氨基酸分离，用经典色谱法，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。高效液相色谱法的特点2．高效液相色谱法与气相色谱法（l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行

3、分离和分析。(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。高效液相色谱法的特点分析速度快——通常分析一个样品在15~30min，有些样品甚至在5min内即可完成。选择性高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，可分析同类型的

4、有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体。灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。高效液相色谱法的特点超高效液相色谱(UPLC)—是区别于HPLC的液相色谱新领域—基于小颗粒填料和LC原理的一种创新技术—实现超高分离度、灵敏度、分析速度1高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱仪工作原理•高压输液系统•

5、进样系统•分离系统•检测系统高效液相色谱仪工作原理其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。高效液相色谱仪工作原理1．高压输液系统由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合

6、密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。高效液相色谱仪工作原理2．进样装置高效液相色谱仪工作原理3分离系统——色谱柱色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金

7、属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备往内径较大，可达25mm以上。一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技的性能不受影响。柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。高效液相色谱仪工作原理4．