定性免疫学检验的性能验证与质量控制.ppt

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1、杨方华定性免疫学检验的性能验证与质量控制CNAS-CL39：2012《医学实验室质量和能力认可准则》在临床免疫学检验领域的应用说明：检验方法和程序的分析性能验证内容应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少应包括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比对），精密度（包括重复性和批间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如筛查、诊断、确认。一、定性免疫试验的性能验证筛查试验诊断试验确认实验C50C5C95性能验证相关概念一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。对特定试剂

2、，C50一旦确定，是恒定不变的。临界点（C50）浓度的定义C50一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴性结果时该分析物的浓度。C5浓度的定义C5一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳性结果时该分析物的浓度。C95浓度的定义C95质控品：商用或自备，含阳性和阴性。C50和C5（C50-20%）及C95（C50+20%）浓度样本：用于重复性及最低检出限验证，不少于40次检测量。临床样本或血清盘：用于准确性验证，不少于50份阳性和阴性样本。性能验证的样本准备纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性检测方法

3、的不精密度。量值化定性试验：以COI（cut-offIndex）或S/CO比值作为分析方法的精密度评价指标。（一）不精密度的验证定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。纯定性测定不精密度的评估方法分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线两种不同方法的不精密度曲线比较检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的临界浓度，但需验证。如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度，这一稀释度的分析物浓度即为临界点（C50）。如何获得“临界点（C5

4、0）”制备评价用样本制备3份样本：一份浓度为C50，一份为C50+20%，一份为C50-20%。每份样本的体积需保证40次或更多次重复检测的需要。评价方法每份样本检测40次，确定每一份样本结果为阳性和阴性的百分比。纯定性试验不精密度评价步骤-20%～+20%浓度范围在C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样本检测结果不一致；此结论错误率5%，需使用更宽浓度范围的样本（如±30%）进行另外的试验。不精密度评价结果判断-1-20%～+20%浓度范围包含了C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样本检测结果一致不精密度评价结果判

5、断-2用该方法检测，C50+20%的样本检测结果一致，C50-20%的样本不一定能得到一致结果；需要用低于C50更大百分率浓度的样本（如-30%）进行补充试验。不精密度评价结果判断-3用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。不精密度评价结果判断-4有些定性免疫测定，如ELISA等，样本的测定结果可以COI（cut-offIndex）或S/CO比值来表示，检测系统或试剂厂家会在其试剂说明书中给出试剂的批内和批间变异，这对于对实验室评价试剂的精密度以及评估

6、其室内质控的批间变异结果有参考价值。分为批内精密度评估和批间精密度评估数值化定性免疫测定的精密度评价方法操作者必须熟悉检测系统工作原理，了解并掌握仪器的操作步骤和各项注意事项，应在评估阶段维持仪器的可靠和稳定。用于评估试验的样本一般常采用临床实验室收集的血清(浆)样本；当实验室收集的样本不稳定或不易得到时，也可考虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商品物质，如校准品或质控品。精密度评估的基本原则（1）评估精密度时，应至少评估两个浓度水平样本的精密度。所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少有一个浓度在医学决定水平左右，在定性测定，即为接近临界水平的浓度。精密度评估的

7、基本原则（2）评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤10%。批内精密度的评估评估方法：三个不同浓度的样本，在10天以上时间内单次重复进行至少20批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。质量控制：判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。ELISA的批间变异CV%应≤15%。批间精密度的评估检测限（limitofdetection）是指检测方法可检测出的最低被测量

8、浓度，也称