土壤中分解尿素的细菌分离和计数.ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数微生物的培养与应用细菌脲酶分离产生脲酶的细菌尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3课题背景课题目的土壤中尿素分解菌的分离与计数从土壤中分离出能够分解尿素的细菌统计每克土样中究竟含有多少这样的细菌思考：PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？()A．土壤中B．海水中C．热泉中D．冷库中C如何寻找耐高温的酶？—寻找高温环境；原理：热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数的微生

2、物，使得耐热的Taq细菌脱颖而出。选出耐高温细菌后，从耐高温菌种中提取耐高温酶。1、自然界中目的菌株的刷选原理：一、筛选菌株2、实验室中筛选微生物的原理：（纯且活的菌种）在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去找。人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？此配方能否筛选出分解尿素的细菌？为什么？?

3、碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。3、方法：利用选择培养基分离选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。(1)在培养基中加入某种化学物质。利用选择培养基分离微生物的方法：例如，加入青霉素可以分离出；加入高浓度的食盐可以得到。酵母菌和霉菌金黄色葡萄球菌这里的加入是在培养成分的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离；尿素作为唯一氮源时，可以分离出石油作为唯一碳源时，可以分离出固氮微生物能消除石油污染的微生物能分解尿素的细菌(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环

4、境中培养可以得到耐高温的微生物本课题使用的培养基的配方如下：请分析后回答：(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。(2)该培养基为____________培养基(按物理状态分)，理由是______________。(3)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？____________________________________________________________________________。葡萄糖尿素固体有凝固剂琼脂有选择作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利

5、用尿素的微生物才能够生长二、统计菌落数目1、方法：常用稀释涂布平板法统计活菌的数目原理：当样品的时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的。为了保证结果准确，一般选择菌落数在统计通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少的活菌。要求：30∼300个菌落的平板稀释度足够高一个活菌例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的

6、平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值?用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因

7、此统计结果一般用菌落数表示。=（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。缺点：操作复杂，实验结果有一定的误差。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低每克样品中的菌株数=（C/V)XMC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。计算公式：显微镜直接计数优点：缺点：计数方便，操作简单死菌、活菌都计算在内，统计结果比实际值偏大（统计菌株数目）1、产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（）A一个细菌、液体培养基B许多细菌、液体培养基C一个细菌、固体培养基D许多细菌、固体培养