放线菌的分离与鉴定.doc

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1、放线菌的分离与鉴定一﹑实验目的：通过对放线菌生理生化特点的研究，1学会从土壤中观察到放线菌菌落形态。2学会从土壤中分离出放线菌。二﹑实验原理：放线菌在自然界中分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤空气和水中。放线菌具有分支状菌丝，革兰染色为阳性。放线菌的孢子也具有不同的形状，有球形、椭球形、杆状、柱状。根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，可以用合成培养基培养，放线菌常用稀释平板法分离。通过稀释平板法和涂布法，可以使放线菌在固体培养基上形成单独的菌落，挑取后在镜检能到纯菌株。三﹑药品和材料：土样，革兰氏

2、染液，高氏一号合成培养基四﹑实验方案：1培养基的配置（就是配置高氏一号合成培养基）(高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基，是采用化学成分完全了解的纯试剂配制成的培养基。高氏培养基加入酚可抑制细菌与霉菌而不抑制放线菌)2土壤中放线菌的分离（1）待测样液的制备：取5只干燥无菌试管，编号，分装，在无菌纸上称取样品5g土样，放入有无菌水的三角瓶中，振荡，用吸管吸取0.5ml注入4.5ml无菌水的试管，混匀，作为10-1稀释液，类推依次制成10-2、10-3、10-4、10-5几种稀释度的土壤溶液。(如果稀释度

3、不够，放线菌抑制了或者菌落太小，而其他细菌的菌落又太多，不容易找到)(2）稀释平板法与涂布法相结合分离土壤中放线菌：取2支1ml移液管分别从10-4、10-5菌悬液中吸1ml菌悬液，放入编号为10-4、10-5的培养皿内。将高氏一号培养基倒入上述各培养皿内，混合均匀等到凝固。从稀释度为10-2、10-3、10-4、10-5，的菌悬液中分别吸取0.1ml涂布在高氏一号平板培养基上，每个稀释度涂三个平板。（3）划线：挑选出不同的单菌落，并在平板上进行三次划线。（4）培养：将平板放在28℃培养箱中培养7天。（

4、5）挑菌落：挑取单个的菌落，在镜检，最后定为纯培养。3放线菌的鉴定1通过光学显微镜对分离出的菌落进行观察并且通过放线菌的形态特征来鉴定出放线菌（放线菌的菌落一般为圆形，菌落质地紧密表面绒状且干燥）2通过显微镜对放线菌的孢子丝和孢子进行观察来鉴定出放线菌（放线菌的孢子丝在特定时候形成的孢子含有不同色素，成熟的孢子也有特定的颜色）3用革兰氏染液对放线菌进行复染（放线菌是有分支状菌丝体的细菌，革兰染色为阳性，染色后放线菌与环境形成对比，能清楚地观察到放线菌的形态特征）