DB32∕T 2385-2013 梨果实主要风味品质的测定——HPLC 法.pdf

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1、ICS67.080.01B31备案号：41080-2014DB32江苏省地方标准DB32/T2385—2013梨果实主要风味品质的测定——HPLC法HPLCAnalysisRegulationforDeterminationofMainFlavorQualityinPearFruit2013–12–30发布2013–01–20实施江苏省质量技术监督局发布DB32/T2385—2013前言为了更方便、更有效地检测梨果实主要风味指标，为评价不同梨果实风味品质提供参考依据，特制订本标准。本标准编写格式按GB/T1.1-2000《标准化工作导则第一部

2、分标准的机构和编写的规则》和GB/T1.2-2002《标准化工作导则第2部分标准中规范性技术要素内容的确定方法》的规定编写。本标准由南京农业大学提出。本标准由南京农业大学园艺学院负责起草。本标准主要起草人：张绍铃、陶书田、齐开杰、吴俊、高永彬、吴巨友、谢智华、李梦。IDB32/T2385—2013梨果实主要风味品质的测定--HPLC法1范围本标准规定了梨果实可溶性糖、有机酸及维生素C（Vc）等主要风味指标的检测技术。本标准适用于梨果实可溶性糖、有机酸及Vc的测定。2原理液氮研磨梨果实样品，可以使样品磨得更细、更充分，使提取率增加。37℃恒温超

3、声波处理能充分提取梨果实可溶性糖和有机酸；超声波冰浴浸提可充分提取果实中Vc。高效液相色谱（HPLC）准确、可靠测定梨果实可溶性糖、有机酸及Vc等成分。3试剂果糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、苹果酸、柠檬酸、莽草酸、奎宁酸、琥珀酸、草酸及维生素C均为色谱纯；其余化学试剂为分析纯；溶液配制采用超纯水（18.2MΩ·cm）。3.120mmol/L磷酸氢二钠缓冲液：称取2.400g磷酸二氢钠，溶解于超纯水，用磷酸调配pH2.6，用容量瓶定容至1L。3.22%的甲醇：20ml甲醇溶于980ml的20mmol/L磷酸氢二钠缓冲液。3.35%的甲醇：50ml甲

4、醇溶于950ml的20mmol/L磷酸氢二钠缓冲液。3.480%的甲醇：取80ml甲醇于100ml容量瓶中，加超纯水定容至100ml。3.52%偏磷酸缓冲液：称取2.000g偏磷酸结晶，用超纯水定容至1L。4仪器4.1冰箱：温度可调至-16℃～-20℃。4.2研钵。4.3天平：精度分别为0.001g和0.0001g。4.4Milli-Q超纯水系统。4.5Waters1525液相色谱仪。4.5.1TransgenomicCOREGET-87碳水化合物柱。1DB32/T2385—20134.5.2TransgenomicCARBSepCorege

5、l87Ccartridge保护柱。4.5.3AgilentZorbaxrSB-Aq柱（4.6mm×250mm，5μm）。4.5.4Waters2414示差折光检测器。4.5.5Waters2487紫外检测器。4.6RE-3000真空旋转蒸发器。4.7高速冷冻离心机。4.8恒温水浴锅。4.9制冰机。5分析步骤5.1试样制备3取成熟梨果实10～20个（小型果可适当增加果个数），去除果皮和果核，将果肉切成约1cm的块，混匀。5.2可溶性糖、有机酸及维生素C提取5.2.1可溶性糖和有机酸的提取：取一定量的果肉，用液氮磨成粉，准确称取2g粉末状的果肉，

6、加入提取液（80%的乙醇溶液），37℃水浴加热30min，超声波提取15min，12000g×15min×4℃条件离心，将上清转移至25ml容量瓶中，重复提取三次，定容，然后取2ml用旋转蒸发仪蒸干，再用超纯水定容1ml，再经过C18SPE柱和0.45μmSep-Pak微孔滤膜过滤。5.2.2维生素C的提取：取一定量的梨果肉，经液氮磨成粉，准确称取1g粉状果肉，用5ml0.2%的偏磷酸冰浴超声波浸提15min，12000g×15min×4℃条件离心，取上清定容至10ml，取1ml经0.45μmSep-Pak微孔滤膜过滤。5.3测定采用高效液相

7、色谱（HPLC）对可溶性糖、有机酸及维生素C进行测定。5.3.1可溶性糖的测定：采用TransgenomicCOREGET-87碳水化合物柱，外加TransgenomicCARBSepCoregel87Ccartridge保护柱。柱温：85℃，参比池温度：35℃；流速：0.8ml/min；Waters2414示差折光检测器；流动相：脱水后的超纯水。每次进样体积为5μl。5.3.2有机酸的测定：色谱柱为AgilentZorbaxrSB-Aq柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为2%的甲醇（20ml甲醇溶于980ml的20mmol/L磷酸

8、氢二钠缓冲液，pH2.6）；流速为0.7ml/min，柱温：35℃；检测器类型：Waters2487紫外检测器，波长210nm，进样量为5μl。5.3.3维生素C的