生物科学毕业论文 红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离.doc

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1、本科生毕业设计（论文）(2009届)题目：红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离学院：化学与生命科学学院专业：生物科学学生姓名：付文佳学号：05260204指导教师：杨莉职称：副教授合作导师：职称：完成时间：2009年5月20日成绩：浙江师范大学本科毕业设计(论文)正文目录摘要1英文摘要11引言12材料22.1植物材料22.2实验试剂22.3主要仪器和设备23方法33.1总RNA提取33.1.1常用试剂配制33.1.2器具处理与准备33.1.3提取RNA33.2RNA的纯化43.3RNA提取质量与含量检测43.

2、3.1总RNA的电泳分析43.3.2总RNA含量与纯度测定43.4cDNA链合成53.4.1cDNA一链的合成53.4.2cDNA第二链合成53.5基因的克隆及序列分析63.5.1基因的克隆63.5.2割胶回收63.5.3T-载体连接64结果与分析74.1RNA电泳结果分析74.2RNA紫外分光光度计测定结果分析74.3纯化后RNA电泳结果分析84.4合成cDNA电泳结果分析84.5PSY基因的克隆94.6序列性分析95讨论12参考文献14致谢词16红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离化学与生命科学学院生物科

3、学专业付文佳（05260204）指导老师：杨莉（副教授）摘要：采用改良Bugos法提取红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚成熟果实果肉RNA，逆转录合成cDNA。根据NCBI网站公布的PSY基因全序列设计引物，采用高保真Taq聚合酶进行PCR扩增，将扩增产物连接到pUCm-T载体，转化至大肠杆菌DH5α，并送公司测序。比较发现，红肉蜜柚和琯溪蜜柚果肉PSY基因全长均为1317bp，编码439个氨基酸，序列比对结果显示两者PSY基因与柑桔属PSY基因同源性都相对较高，同源性最高达99%。关键词：红肉蜜柚；琯溪蜜柚；PSY基因；

4、基因分离；序列分析IsolatingPSYGenefromRed-fleshedSweetPomeloandItsParentGuanxiSweetPummeloFUWen-jiaDirector:YANGLi(CollegeofChemistryandLifeScience,ZhejiangNormalUniversity,052No.04)Abstract：ThetotalRNAwasextractedfromtheripefruitofRed-fleshedsweetpomeloandGuanxisweet

5、pomelousingimprovedBugosRNAextractionmethod,thenweresynthesisedcDNAbyreversetranscriptasekit.Atthesametime,wedesignedprimersforPSYgenesequencesaccordingtotheinformationPSYgenesequencesonNCBI,high-fidelityTaqpolymerasewereusedforPCRamplificationandcDNAasthetem

6、plate.Finally,thePCRproductswereconnectedtopUCm-Tvector,thensequencedandanalyzedthesequences.SequenceanalysisindicatedthatthecDNAfragmentwas1317bp,encodinga439aminoacidproteinandhaved99%identitywiththoseofothercitrusinthehighestlevel.Theresearchingmaybeessent

7、ialforthemolecμLarmechanismofPSYgenemutation.KeyWords：red-fleshedsweetpomelo;guanxisweetpummelo;PSYgene;geneisolationing;sequenceanalysis1引言芽变是体细胞突变的一种，即突变发生在芽分生组织细胞中，当芽萌发长成枝条，表现出与原来植株不同的性状即为芽变，经突变的芽长成枝条经繁育可成为变异单株，是果树等多年生作物的一种特殊育种途径[1]。红肉蜜柚源自琯溪蜜柚芽变，是平和县小溪镇厝丘村

8、果农林金山于1988年在自家果园发现的优良芽变株[2]。之后，由福建省农科院果树研究所及平和县农业局等组成课题组，进行新品种的选育、保护和繁殖工作。经专家3年实地跟踪验证，认为该品种具备新颖性、特异性、一致性和稳定性，并于2006年正式通过了专家组的品种认定，正式命名红肉蜜柚[3]。经检测：红肉蜜柚的微量元素比野生型琯溪蜜柚含量更丰富，所含的黄酮类和类胡萝卜素共同具有抗癌