实验五 抗生素抗菌谱测定-药学药剂课件.ppt

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1、实验六抗生素抗菌谱及微生物的耐药性的测定实验目的和内容目的：1、学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。2、学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策内容：抗生素的抗菌谱确定微生物耐药性的测定抗生素抗菌谱的测定抗生素——是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。抗生素的作用机制1、抑制细胞壁的合成，如青霉素、头孢菌素等；2、引起细胞壁降解，如溶葡球菌素；3、干扰细胞膜，如短杆菌肽、多粘菌素；4、抑制蛋白质的合成，如

2、链霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、红霉素等；5、抑制DNA合成，如狄霉素、萘啶酮酸、灰黄霉素等；6、抑制DNA复制，如丝裂霉素；7、抑制RNA的转录，如放线菌素D；8、抑制RNA合成，如利福平、利福霉素等抗生素的抗菌谱各种抗生素有其不同的制菌范围，即抗菌谱青霉素、红霉素：抗G+链霉素、新霉素：抗G-庆大霉素、万古霉素、头孢菌素：兼抗G+和G-氯霉素、四环素、金霉素、土霉素等：G+和G-以及立克次氏体、衣原体、支原体等实验材料菌种：各种不同来源的细菌。培养基：牛肉膏蛋白胨培养基供试抗生素：卡那霉素（母液浓度50mg/mL，溶于水)设备与用具：恒温培养箱、接种环、培养皿。实验步

3、骤1倒（牛肉膏蛋白胨＋卡那霉素）平板，使培养基中卡那霉素得终浓度为30μg/mL。2将平板(皿底）划分为6等份，每一等份内标明一种细菌的名称；3用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域4将划好线的细菌平板，置37℃倒置培养48h。5记录细菌的生长情况，根据细菌的生长情况，可初步确定卡那霉素的抗菌谱。实验结果记录各种不同来源的细菌的生长情况微生物耐药性的测定耐药性(antibioticresistance)——即抗药性,指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。耐药性产生的原因1、产生一种使药物失去活性的酶；2、把药物

4、作用的靶位加以修饰和改变；3、形成“救护”途径4、使药物不能透过细胞膜；5、通过主动外排系统把进入细胞内的药物泵出细胞外；实验材料菌种：大肠杆菌。培养基：牛肉膏蛋白胨培养基供试抗生素：氨苄青霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、壮观霉素和链霉素、无菌水设备与用具：恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。滤纸片法测定微生物的耐药性滤纸片法测定微生物的耐药性所需浓度抗生素溶液配制A氨苄青霉素（50μg/mL)，B卡那霉素（50μg/mL)，C四环素（50μg/mL)，D氯霉素（50μg/mL)，E链霉素（50μg/mL)，F壮观霉素(50μg/mL)，实验步骤1倒牛肉膏蛋白胨平板2取0.

5、1ml大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。3将平板(皿底）划分为6等份，每一等份内标明一种抗生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。4将贴好滤纸片的含菌平板，置37℃倒置培养48h。5测量并记录抑菌圈的直径，抑(杀)菌圈的大小，能够反映抗生素抑(杀)菌能力的大小；根据其直径的大小，可初步确定大肠杆菌对各种抗生素的耐药性情况(或敏感性情况)(自带尺子）①青霉素②卡那霉素③四环素④氯霉素⑤链霉素⑥壮观霉素⑦无菌水⑦抗生素抑（杀）菌圈直径/mm抗生素抑（杀）菌圈直径/mm氨苄青霉素氯霉素卡那霉素链霉素四环素壮观霉素实验结果思考题1、什么叫抗生素？什么是抗菌

6、谱？2、抗生素对微生物的作用机制有那几种？试举例说明之。3、什么是耐药性？微生物产生耐药性的原因有哪些？4、为避免产生细菌的抗药性，使用时要注意些什么？