高效液相色谱分析法课件.ppt

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1、第六章高效液相色谱法Chapter6HighPerformanceLiquidChromatography本章学习应该关注的几个问题问题一高效液相色谱法与其它色谱法有何不同？高效液相色谱法利用什么设备实现分离？问题二高效液相色谱法有何应用？问题三问题一高效液相色谱法与其他色谱法有何不同？问题1.1高效液相色谱法与经典液相色谱法有何不同？问题1.2高效液相色谱法与气相色谱法有何不同？问题1.3高效液相色谱法如何实现组分的高效分离？第一节概述问题1.1高效液相色谱法与经典液相色谱法有何不同？一、高效液相色谱法与经典液相色谱法

2、固定相颗粒大小流动相输送压力样品分离速度检测器灵敏度采用颗粒极细、规则均匀的固定相，传质阻力小，分离效率高。第一节概述问题1.1高效液相色谱法与经典液相色谱法有何不同？一、高效液相色谱法与经典液相色谱法经典液相色谱高效液相色谱色谱柱：柱长10~200cm，内径10~50mm色谱柱：柱长10~25cm，内径2~10mm常压或减压高压：40~50MPa填料颗粒大：75~600m（200~30目）填料颗粒小：2~50m（2500~300目）柱效低：20~50块塔板/m柱效高：40000~60000块塔板/m分析速度慢：1~2

3、0h分析速度快：0.05~1.0h色谱柱只用一次色谱柱可重复多次使用不能在线检测能在线检测高效和经典液相色谱法比较表第一节概述问题1.2高效液相色谱法与气相色谱法有何不同？二、高效液相色谱法与气相色谱法流动相选择范围分离过程样品状态色谱柱柱温分离对象性质第一节概述问题1.2高效液相色谱法与气相色谱法有何不同？二、高效液相色谱法与气相色谱法高效液相色谱法和气相色谱法比较表气相色谱高效液相色谱只能分析挥发性物质（约20%的物质）几乎可以分析各种物质不能用于热不稳定物质的分析可以用于热不稳定物质的分析用毛细管柱色谱可得到很高的柱

4、效色谱柱不能很长，柱效不会很高有很灵敏的检测器（ECD）和较灵敏的通用检测器（FID,TCD)有灵敏度较高的通用检测器（ELSD）流动相为惰性气体，与组分无作用流动相为不同极性液体，与组分作用运行和操作容易，运行成本低运行和操作较难，运行成本高仪器制造难度较小仪器制造难度较大第一节概述问题1.3高效液相色谱法如何实现组分的高效分离？三、高效液相色谱分离理论可忽略a.采用合适的流动相，控制相对较小的流动相流速；b.采用颗粒直径极小的固定相；c.色谱柱填充均匀；d.减小固定相液膜厚度；影响高效液相色谱峰扩张的主要因素：A和Cu

5、项u最佳Hu0AB/uCu问题二高效液相色谱法利用什么设备实现分离？问题2.1高效液相色谱仪由哪几部分组成？问题2.2高效液相色谱仪各部分的功能如何？第二节高效液相色谱仪问题2.1高效液相色谱仪各部分的功能如何？一、高效液相色谱仪流程储液器进样器色谱柱检测器数据处理系统馏分收集器高压泵高压输液系统梯度洗脱装置第二节高效液相色谱仪二、高压输液系统作用为色谱分离提供流速恒定的流动相。储液器、高压输液泵、过滤器和压力脉动阻力器。组成密封；流量恒定；压力平稳、可调；易于更换溶剂。要求常用高压输液泵恒压泵恒流泵问题2.1高效液相色谱

6、仪各部分的功能如何？第二节高效液相色谱仪三、进样系统作用定量引入样品。隔膜注射进样器、高压进样阀。种类死体积小。要求六通阀进样过程示意图问题2.1高效液相色谱仪各部分的功能如何？柱外效应第二节高效液相色谱仪四、分离系统-色谱柱作用实现样品组分高效分离。柱管材料柱管+固定相。组成不锈钢、聚合材料。柱管尺寸内径：4-5mm长度：10-50cm填料直径5-10m塔板数7000-10000色谱柱填装好坏是影响柱效的重要因素问题2.1高效液相色谱仪各部分的功能如何？第二节高效液相色谱仪五、检测系统作用要求将样品组分的量定量转化为电

7、信号并放大、输出。灵敏、噪音小、响应快、线性范围宽、死体积小。类型溶质型、总体型。种类紫外-可见检测器(UVD)；荧光检测器(FLD)；折光检测器(RID)；蒸发光散射检测器(ELSD)。电化学检测器(ED)；问题2.1高效液相色谱仪各部分的功能如何？第二节高效液相色谱仪五、检测系统1.紫外-可见检测器和光电二极管阵列检测器可调波长紫外-可见检测器固定波长紫外-可见检测器溶质型问题2.1高效液相色谱仪各部分的功能如何？第二节高效液相色谱仪五、检测系统1.紫外-可见检测器和光电二极管阵列检测器特点灵敏度高；线形范围宽；对流动

8、相和温度变化不敏感。溶质型可用于梯度洗脱只能用于有紫外-可见吸收的样品组分的检测光电二极管阵列检测器(PAD)问题2.1高效液相色谱仪各部分的功能如何？第二节高效液相色谱仪五、检测系统2.荧光检测器特点灵敏度高；选择性好；线性范围窄。溶质型可用于梯度洗脱只能用于有荧光的样品组分的检测问题2.1高效液相色