免疫沉淀用细胞裂解液.doc

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1、技术咨询电话：400-607-9999免疫沉淀用细胞裂解液LysisSolutionforImmunoprecipitation货号:P060028产品及特点本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞，使之释放出细胞内蛋白，用于后续实验。它具有以下优点：1.快速裂解，多种裂解成分经过精心优化，能快速使细胞裂解。2.非变性（P060028）产品能最大程度地保留蛋白天然结构和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，还可以用于蛋白活性检测（信号传递研究和酶动力学检测）和WesternBlot等各种后续实验。3.适用于培

2、养细胞（包括悬浮细胞）和新鲜组织。规格及成分成份50mL包装（CAT#:P060028）本产品（CAT#:P060028）50mL使用手册1份运输及保存常温运输、4℃保存，有效期一年。使用方法注意事项1、如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。2、如果用于信号传递研究，最好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。3、整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS均需预先冷却。4、注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话：400-607-99

3、99本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响，因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。一：处理贴壁的培养细胞1、去除贴壁细胞培养液，用冰浴预冷的PBS洗两遍，去尽残留的PBS。2、将培养板放置在冰上待用。3、按每106个细胞加入0.1mL本产品（或100mm贴壁细胞加1mL本产品）的比例向培养板中加入适量的本产品（按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL之间）。注意：裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1～2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品；25cm2培养瓶(3～6×106

4、细胞)需要0.3~0.6mL；75cm2培养瓶(1～2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞，需要用户摸索最佳用量。4、冰上放置10-30分钟（最佳时间跟细胞系相关），其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。5、将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端，并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。6、15,000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。7、使用前最好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。二：处理

5、悬浮细胞1、400×g，4℃离心10分钟收集悬浮细胞，弃上清。2、用等体积的预冷PBS洗涤细胞沉淀两遍，步骤同第一步。3、按每106个细胞加入0.1mL本产品的比例加入本产品，充分悬浮细胞。4、冰上放置15分钟裂解细胞，期间偶尔轻柔震荡。5、15,000×g，4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀，最好留20-40uL液体不取。6、将上清液放置在冰上待用或放-80℃注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话：400-607-9999长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。1、使用前最

6、好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。三：处理组织块1、称量组织块，用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆，用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。2、将匀浆物转移到离心管中，1500g、4℃离心5分钟后弃上清。3、按每50mg组织加入0.2mL本产品的比例加入预冷的本产品，吹打混匀，放置冰上。4、每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次，共4次。5、15,000×g、4℃离心10分钟，将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，最好新鲜使用。6、使用前最好先测

7、定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途