c1050非变性细胞裂解缓冲液

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1、北京普利莱基因技术有限公司www.applygen.com.cn010-6205318662027915sale@applygen.com.cn变性/非变性细胞裂解产物制备试剂盒(CellysateTMpreparationKit，#C1054)非变性细胞裂解缓冲液(NondenaturingLysisBuffer，#C1050)变性细胞裂解缓冲液(DenaturingLysisBuffer，#C1052)描述：变性/非变性细胞裂解产物制备试剂盒(CellysateTMpreparationKit，#

2、C1054)包括变性(#C1052)或变性(#C1050)裂解缓冲液，提供完整的细胞蛋白制备方案。非变性细胞裂解缓冲液(NondenaturingLysisBuffer,#C1050)内含非离子型去垢剂和盐，能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。另外，有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点，这种情况应该使用非变性裂解。变性细胞裂解缓冲液

3、(DenaturingLysisBuffer，#C1052)用于变性裂解，适宜于如下几种情况：(1)抗原是不溶性蛋白，如不溶性的细胞骨架和膜蛋白或高度疏水蛋白；(2)抗原位点隐匿于蛋白高级折叠结构之中；(3)易集聚沉淀的蛋白；(4)体外翻译产生的蛋白。在含离子型去垢剂的变性细胞裂解缓冲液(#C1052)中加热裂解细胞，可在变性条件下释放蛋白。随后，将变性蛋白裂解产物10倍稀释于非变性细胞裂解缓冲液(#C1050)中；变性裂解产物中的离子型去垢剂将被溶液中过量的非离子型去垢剂包裹进入到微小的微粒之中，从

4、而恢复变性蛋白的抗原抗体结合活性。适宜于蛋白免疫共沉淀或WesternBlot研究。储存：4oC避光。制备非变性细胞裂解产物((NondenaturingLysisBuffer，#C1050)1.Collectcells:Thenumberofcellsnecessarytodetectanimmunoprecipitatedantigendependsonthecellularabundanceoftheantigen,andalsoontheefficiencyofradiolabelingifp

5、erformed.Approximately0.5-2´107cellsarerequiredtoyield1mllysate,whichistheamountgenerallyusedforeachimmunoprecipitation.Foradhesivecellsgrowingat80%to90%confluenceinacultureplateorflask:Discardculturemedium.RinsecellstwicewithPBS.Placethetissueculturepl

6、ateonice.Add1-1.5ml(orsuitablevolume)ice-coldNondenaturingLysisBuffertothecultureplate,scrapethecellsofftheplatewitharubberpoliceman,andtransferthesuspensiontoa1.5-mlmicrocentrifugetube.GotoStep3.Alternatively,adhesivecellscanbedisassociatedwithNon-enzy

7、meCellDetachSolution(Cat#C1000),whichavoidusingproteasethatdegradesproteins.Collectcellsasdescribedbelowfornonadherentcells.Fornonadherentcells:Collectcellsinsuspensionbycentrifuging5minat500´gat4oC.Discardsupernatant.Washcellstwicewithice-coldPBS,andce

8、ntrifugeasabove.2.LysisofCells.Add1ml(orsuitablevolume)ice-coldNondenaturingLysisBuffertothecellpellet.3.Extractionofcellularproteins:Vortexfor10seconds.Keepsuspensiononicefor20min.4.Centrifugethelysateat12,000´gfor15min,at4oC.Th