双向电泳法比较两种蛋白质组样品制备方法-论文.pdf

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1、638军事医学2014年8月第38卷第8期MilMedSci，Vol38，No8，Aug，2014双向电泳法比较两种蛋白质组样品制备方法崔勇，王东澍，冯尔玲，刘先凯，王恒棵，朱力[摘要]目的比较两种破碎方法提取的蛋白质样品在双向电泳(2一DE)中的分离效果。方法用超声破碎和玻璃珠振荡破碎方法分别制备革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织的蛋白抽提样品，通过2-DE比较两种制样方法的实际效果。结果获得了革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织在两种制样条件下的2-DE图。结论通过对比不同样品的电泳结果发现，玻璃珠振荡破碎法制样背景更低，更有利于后续的图像分析。[关键词]蛋白

2、质组学；电泳，凝胶，双向；蛋白提取；超声破碎法；玻璃珠振荡破碎法[中图分类号]Q51[文献标志码]A[文章编号]1674-9960(2014)08-0638-04DOI：10．7644／j．issn．1674-9960．2014．08．017Comparisonoftwoproteinpreparationmethodsbytwo—dimensionalgelelectrophoresiscu／Yong'，WANGDongshu，FENGEr—ling，LIUXian—kai，WANGHeng—liang，ZHULi(1．SchoolofLifeScienc

3、es，AnhuiUniversity，Heifei230011，China；2．InsituteofBiotechnology，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Bering100071，China){Correspondingauthor，Tel：010-66948835，E—mail：jewly54@126．con[Abstract]ObjectiveTocomparetheseparationeffectsofproteinsamplesextractedbytwodifferentmethodswithtwo—dime

4、nsionalgelelectrophoresis(2-DE)．MethodsUltrasonicdisruptionandglass-beadsgroundingwereusedtoprepareproteinsamplesofGram—negativebacteria，Gram—positivebacteriaandanimaltissues．Theactualresultsofthetwosamplepreparationmethodswerecomparedby2-DE．ResultsThe2-DEmapsofsamplesextractedbyth

5、etwomethodswereobtained．ConclusionThe2-DEmapsofglass—beadsgroundingsamplesarebetterthanthoseofultrasonicdisruptionthankstotheirlowerbackgrounds，whicharebeneficialforfurtherimageanalyses．[Keywords]proteomics；electrophoresis，gel，two—dimensional(2-DE)；proteinextraction；ultrasonicdisru

6、ption；glass—beadsgrounding蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，在蛋白不失为有效的破碎方法。同时有文献阐述振荡破碎质多肽谱和基因产物图谱技术上发展起来的一门学在革兰阳性菌提取核酸的应用m'“，作为借鉴也可科。蛋白质组研究主要包括3个方面J：①蛋白质用来提取蛋白质。本实验拟分析不同破碎方法对微量特征的大规模鉴定及对蛋白质翻译后的修饰研2-DE蛋白样品的影响，选取的样品涵盖革兰阴性究；②比较蛋白质表达水平差异的研究；③不同蛋白菌、革兰阳性菌和动物组织。间相互作用的研究，构建细胞功能连锁图。双向电1材料与方法泳(2-DE)是蛋白质组学中最为重

7、要的技术之一2J，由于这种技术极大提高了蛋白质分离的分辨率，而1．1材料得到了广泛的应用。2．DE技术现已广泛应用于生炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)B17D1，革兰物医学、原核生物、真核生物等领域J。阳性菌；大肠杆菌MG1655，革兰阴性菌，均为本实蛋白样品的制备是整个2-DE的第一步，因而验室保存。动物组织为小鼠大脑海马区和兔肝脏。直接影响2-DE的结果。有报道称，超声波破碎在SS一3000酶联仪、ProteanlIXi垂直板SDS．提取蛋白质、核酸和其他活性物质方面的应用]，PAGE电泳仪(Bio—Rad公司)；SONICSVC750

8、型超声仪；Precellys24震荡破碎仪(Bert