汾酒大曲宏蛋白质组的制备与双向电泳技术的建立-论文.pdf

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1、第30卷第6期生物学杂志Vo1．30No．62013年12月J0URNALOFBIOLOGYDee，2013doi：10．3969／j．issn．2095—1736．2013．06．050汾酒大曲宏蛋白质组的制备与双向电泳技术的建立张武斌，张秀红，段江燕(山西师范大学生命科学学院，临汾041004)摘要：采用TCA．丙酮沉淀法、丙酮沉淀、硫酸铵等沉淀法制备汾酒大曲的宏蛋白组样品，并用双向电泳来检测制备效果，结果表明：TCA一丙酮沉淀法制备的样品经电泳分离后，减轻了杂质干扰，其2-DE图谱中竖条纹干扰较少，且获得的蛋白点形状规则、清晰且

2、无明显重叠现象，优于其它两种方法；经过两次水化液溶解的蛋白样品在等电聚焦时能保持4000V较高电压；上样量为300g左右的粗蛋白溶于二次水化液能得到点数更多、分辨率高的电泳图谱。建立了汾酒大曲宏蛋白质组的双向电泳体系，为汾酒品质研究奠定基础。关键词：汾酒大曲；宏蛋白质组；双向电泳中图分类号：Q946．1文献标识码：A文章编号：2095—1736(2013)06—0050一o4ThepreparationofmetaproteomeofFenjiudaquandestablishmentoftwo-dimensionalelectr0p

3、h0resistechnologyZHANGWu—bin，ZHANGXiu—hong，DUANGJiang—yan(CollegeofLifeScience，ShanxiNormalUniversity，Linfen041004，China)Abstract：MetaproteomicssamplesofFenjiudaquwerepreparedbyusingTCA—acetoneprecipitation，acetoneprecipitationandamino—niumsulfateprecipitation，thenanaly

4、zedwithtwo—dimensionalelectrophoresis．TheresultshowedTCAacetoneprecipitationwassupe—riortothatpreparedbytheothertwomethods．In2-DEmap，theinterferenceofverticalstripesdecreased，theproteinsdotswereclearandhadregularshapewithoutsignificantoverlap．Afterdissolvedsamplesinhydr

5、ationsolutiontwice，thevohageduringisoelectricfo—cusingcouldremain4000volts．Whenthesampleloadingwasabout300ug，the2DEmapdisplayedmorespotsandtheresolutionwashigher．Thisstudyestablishedthe2-DEmethodologyformetaproteomicsfromFenjiuDaqu．Keywords：Fenjiudaqu；metaproteomics；two

6、—dimensionalelectrophoresis汾酒是中国的历史文化名酒，是清香型白酒的汾酒大曲是以豌豆和大麦为原料，不加灭菌，粉碎代表。大曲是汾酒酿造中的重要原料，是酿酒生产拌料后进行培制，其中的微生物种类较多，如真菌有酵的糖化、发酵、酒化和生香剂，其品质对出酒率和酒母菌、根霉、毛霉、黄米曲霉、黑曲霉等，细菌有乳酸菌、质都有极大的影响，常有“曲是酒之骨”之称⋯。因醋酸菌、芽孢杆菌、产气杆菌等’。微生物产生的酶而围绕酿酒大曲及质量体系进行了一系列研究，大更加复杂，如多种微生物菌株均能分泌淀粉酶、蛋白酶曲中所含酶系的种类和数量会影

7、响汾酒的风味，故和酯酶，而同一种微生物又可以产生多种不同的酶等。对其进行优化组合，突出和提高特定产品的风味及为了进一步了解大曲中微生物在酿酒中的功能，需对质量是今后中国白酒生产研究的重点。影响汾酒生其在大曲中分泌的蛋白进行分析。产的酶有很多，目前对汾酒大曲胞外酶的研究主要蛋白质组学是由MarcWilkins提出，意指“一种基是对大曲中淀粉酶，酯化酶进行分析，如对淀粉酶的因组所表达的全套蛋白质”，而近几年又提出了宏蛋白提取，酶学性质的研究，但很多研究方法无法确定质组学。。，Wilmes和Bond根据宏蛋白质组学的概微生物的来源。念提出了

8、宏蛋白质组。其研究策略包括总蛋白质的收稿日期：2013—06—06；修回日期：2013—07—15基金项目：山西省自然科学基金(2009011044—2，2012011034—5)；山西师范大学2013年科技开发与应用重