ripa裂解液说明书c1053

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1、普利莱基因技术有限公司www.applygen.com.cn电话：010-62027915,62053186Email:sale@applygen.com.cnRIPA裂解缓冲液(RIPALysisBuffer，#C1053)描述：RIPA裂解缓冲液，提供完整的细胞蛋白制备方案。RIPA裂解液(RIPALysisBuffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPABuffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首

2、选的标准操作，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用于免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用。我们提供的RIPABuffer的成分为：50mMTris-HCl(pH7.4),150mMNaCl,1%NP-40,0.1%SDS，适于westernblot和绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免疫共沉淀。组成：100mlRIPABuffer：50mMTris-HCl(pH7.4),150mMNaCl,1%NP-40,0.1%SDS.储存：4oC。制备细胞裂解产物1.800g4℃离心5分钟收集培养细胞，估计

3、细胞离心后的体积（PCV,106cells=~20ml,107cells=~100mlPCV）；2.每50～100mlPCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250~500ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；3.12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；4.假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。制备组织裂解产物1.取50-100mg组

4、织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；2.加入0.5-1ml预冷RIPA裂解缓冲液；3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；4.12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；5.假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；6.20％的甘油保存于-70oC或-20oC。注

5、意：1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；3.在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。Page1of1ApplygenTechnologiesInc.RevDoc0706