烟草角斑病菌拮抗细菌筛选及抗菌活性物质研究-论文.pdf

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1、第45卷第6期东北农业大学学报45(6)：16-232014年6月JournalofNortheastAculturalUniversityJune2014网络出版时间2014—6—1116：10：16[URL]http：／／www．cnki．net／kcms／detail／23．1391．S．20140613．0953．003．html烟草角斑病菌拮抗细菌筛选及抗茵活性物质研究文景芝，赵黎明，杨晓敏，孙剑萍2刘振平。(1．东北农业大学农学院，哈尔滨150030；2．牡丹江烟草科学研究所，黑龙江牡丹江1570113．黑龙江省职工电化教育中

2、心，哈尔滨150001)摘要：研究从黑龙江省健康烟草植株及其根际土壤和海南三亚采集的2O种杂草中分别分离到287和98个细菌分离物，筛选出对烟草角斑病菌有拮抗活性的菌株22个，其中来自三亚稗草叶片中的一株细菌PA一2的抑茵效果最好，抑菌效果稳定。经形态学、生理生化及分子生物学鉴定，PA一2为铜绿假单胞杆菌(Pseudomonasaeruginosa)。筛选出最佳实验室发酵配方：氮源1％(牛肉膏：蛋白胨=5：3)，葡萄糖0I3％，NaC10．5％，KNO，0．3％；最佳培养条件：发酵温度28℃，培养基pH7．0—7．5，接种量4％，装液量为

3、250mL三角瓶中装液50mL。PA一2优化发酵液的田间防效达69．77％，比农用链霉素防效提高24．47％。采用硫酸铵分级沉淀法分离抑茵活性物质，结果表明，在fNH4)：s0浓度为30％一90％各浓度梯度下均有抑菌活性物质沉淀，其中60％一70％(不含60％)是抑菌活性物质的最适盐析饱和度。抑茵活性物质具有较强的热稳定性、较好的蛋白酶耐受性、较好的耐碱性、较差的耐酸性，能溶于部分有机溶剂，经乙醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和丙酮萃取后，该抑菌活性物质抑菌活性下降范围为1．4％一4％。确定该抑茵活性物质为小分子碱性、水溶性脂肽类物质。关

4、键词：烟草角斑病；拮抗细菌；16SrDNA鉴定；发酵条件优化；抑茵活性物质中图分类号：S476．9文献标志码：A文章编号：1005—9369(2014)06—0016—08文景芝，赵黎明，杨晓敏，等．烟草角斑病菌拮抗细菌筛选及抗菌活性物质初步研J】_东北农业大学学报，2014，45(6)：16—23．WenJingzhi，ZhaoLiming，YangXiaomin，eta1．Screeningofantagonisticba~edalstrainagainstPseudomonassyringaepv．tabaciandstudieso

5、nantagonisticactivesubstances[J]．JournalofNo~heastAgriculturalUniversity,2014，45(6)：16-23．(inChinesewithEnglishabstract)ScreeningofantagonisticbacterialstrainagainstPseudomonassyringaepv．tabacjandstudiesonantagonisticactivesubstances／wENJingzhi’，ZHAOLiming’，YANGXiaomin’，S

6、UNJianping，LIUZhenping。(1．SchoolofAgriculture，NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030，China；2．TobaccoResearchInstituteofMudanjiang，MudanjiangHeilongjiang157011，China；3．WorkersEducationalTechnologyCenterofHeilongjiangProvince，HarI)in150001，China)Abstract：Inthepresents

7、tudy．287and98bacterialstrainswereisolatedfr0mhealthytobaccoplantsandtheirrhizosphedcsoilsamplesaswellas20kindsofweedsfromHainanProvince．inwhich22strainshadantibacterialactivityagainstPseudomonass~ngaepv．tabaci．ThestrainPA-2thatwasidentifiedasPseudomonasaeruginosabymorphol

8、ogical，physiologicalandbiochemicalaswellasmolecularbiologytestswasisolatedfr0mtheleafofEchinochl