禾谷镰刀菌拮抗菌筛选研究方案

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1、由禾谷镰刀菌引起的小麦赤霉病是小麦重要病害之一，也是影响中国小麦生产的重要病害[2]。小麦赤霉病别名红麦头、烂麦头、麦穗枯。在全世界普遍发生，气候湿润多雨的温带地区受害比较严重，在潮湿和半潮湿区域发生率较高。从幼苗到抽穗都可受害，主要引起苗枯、茎基腐、秆腐和穗腐，其中穗腐的危害最为严重。小麦赤霉病的表现小麦赤霉病主要引起穗腐、苗腐和杆腐等症状。最常见的是穗腐。初期在颖片和小穗上会出现浅褐色斑，小穗也会慢慢感染，接着蔓延到邻近小穗，导致小穗枯黄。湿度大时，会产生红色霉层；湿度小时，病小穗枯白，没有霉层产生[3]。种子带菌或土壤中病残体侵染小麦会产生苗腐，刚感染小麦会变得瘦小，时间长了可能会病死。

2、穗下第一、二节则容易发生杆腐，叶鞘上会先出现淡褐色斑点，再向节部内部蔓延，严重时不能抽穗。小麦赤霉病的发病条件在充足的湿度和空气条件下，赤霉病会形成子囊壳和子囊孢子，最适和的生长温度为24～25℃，最低9～10℃，最高32℃。在适宜的条件下2～3d即可产生子囊壳，5～10d形成子囊孢子。在小麦抽穗前后，子囊孢子会随风飘散，飘落在麦穗上，子囊孢子会在颖内花药上腐生，接着整个花器及小穗都会被感染。还会产生分生孢子群，分生孢子会接着随风飘散，接着侵染其它小麦，使病害扩展蔓延[4]。气象条件对小麦赤霉病的影响较大。当平均气温为9℃以上，3～5d的雨天时，便形成了子囊孢子。这会十分有利于子囊孢子的释放和

3、侵染，小麦赤霉病很有可能大流行。小麦赤霉病的危害小麦赤霉病是造成农业损失的主要原因之一[5]，联合国粮农组织（FAO）统计，每年由植物病害引起的减产平均损失为总产量的10%～15%，而其中的80%的损失是由真菌引起的[6]。小麦赤霉病会严重影响小麦的产量，同时还会降低小麦的品质。该还能产生以脱氧雪腐镰刀菌烯醇为主的真菌毒素，能较大的危害人、畜。当有4%的病麦时就不能使用了，这时小麦已经失去了利用价值。1950年以来全国赤霉病大流行12年，中度流行17年，流行的频率为46.8%。1985年全国赤霉病又大流行，仅河南省发病面积就达3.0×106hm2。2000以来赤霉病在中国大流行频率不断增加，发

4、病面积呈明显扩大趋势，有9个年份赤霉病的发生面积就超过了3.3×106hm2。其中仅河南省就有7年的发病面积超过6.7×105hm2。在2012年的赤霉病大流行中，山东省南部和西南部较重，河南省整体偏重，豫南更重，安徽和江苏普遍严重9[7]。赤霉病严重威胁小麦的安全生产，一般的流行年份可引起5%～10%的产量损失，大的流行年份可导致相当多的田块绝收。根据调查2008～2009年度全国11个省的1018个饲料样品的毒素污染情况发现，DON毒素的检出率达95.8%，超标率达17.7%，其中西北地区的超标率高达38.1%，华北和华中地区的超标率则分别为21.0%和20.1%[8]。本课题便是用牛肉膏

5、蛋白胨培养基涂布平板法从小麦根际土壤中分离出细菌，纯化后用平板对峙法进行初筛和复筛。通过形态学方法、生理生化分析进行初步鉴定，研究其抗菌活性，为寻找有效抵御小麦赤霉病的方法奠定基础。2材料与方法2.1供试病原菌和小麦根际土样供试植物病原真菌：禾谷镰刀菌（9435实验室保存）。小麦根际土样：河南工业大学西门大谢村麦田。2.2试剂及仪器2.2.1试剂名称及生产厂家试剂名称规格生产厂家蛋白胨蔗糖牛肉浸膏BRARBR北京双旋微生物培养基制品厂天津市瑞金化学品有限公司北京双旋微生物培养基制品厂可溶性淀粉BR天津市瑞金特化学品有限公司对二甲基氨基苯甲醛AR上海试剂三厂氯化钠AR天津市德恩化学试剂有限公司酵

6、母膏AR北京奥博星生物技术有限责任公司琼脂粉BR上海化学试剂厂有限公司溴百里香酚兰AR上海三爱思试剂有限公司葡萄糖AR天津市科密欧化学试剂有限公司氢氧化钠AR天津市科密欧化学试剂有限公司磷酸氢二钾AR天津市化学试剂三厂柠檬酸钠AR湖南省医药公司化玻站9硫酸镁AR天津市永远化学试剂开发中心乳糖无水乙醇ARAR天津市科密欧化学试剂有限公司天津市永大化学试剂开发中心磷酸二氢铵AR天津化学试剂三厂二甲苯AR洛阳昊华化学试剂有限公司硝酸钾AR天津市瑞金化学品有限公司乙酸（冰醋酸）AR开封市芳晶化学试剂有限公司浓盐酸AR洛阳昊华化学试剂有限公司三氯化铁AR天津市化学试剂工厂碘AR天津市科密欧化学试剂有限公

7、司甲基红AR天津市科密欧化学试剂有限公司结晶紫AR天津市化学试剂三厂次氯酸钠AR天津市光复精细化工研究所番红花红TAR天津市科密欧化学试剂研究所2.2.2实验仪器仪器名称仪器型号生产公司电热恒温鼓风干燥箱XMTD-8222上海精宏试验设备公司高压蒸汽灭菌锅SX-700日本TOMY震荡培养箱HZQ-X100哈尔滨市东联电子技术开发有限公司电热恒温培养箱DHP-9052上海浦东荣本科学仪器有限公司台式