水稻核黄素合酶基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备.pdf

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1、232江苏农业学报(JiangsuofAgr．Sci．)，2010，26(2)：232～235孙力军，刘会敏，任海英，等．水稻核黄素合酶基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备[J]．江苏农业学报，2010，26(2)：232-235水稻核黄素合酶基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备孙力军，刘会敏，任海英，吴廷全，宋韬，董汉松(南京农业大学植物保护学院植物病理学系，农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室，江苏南京210095)摘要：核黄素在生物体内发挥着重要的作用，核黄素合酶()是核黄素合成过程中的一个关键酶。本研究克隆了水稻核黄素合酶基因(OsRS)，并将其在Escherichi

2、acoli中高效表达。表达产物(包涵体)，先用6mo]／L盐酸胍将其溶解，再用8mol／L尿素透析，将获得的蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体。并将抗体与原核表达的OsRS和提取的水稻叶组织总蛋白进行Westernblot分析，确定所制备的多克隆抗体具有较好的免疫反应性，为深入解析水稻中核黄素合酶的催化活性和功能奠定了基础。关键词：水稻；核黄素合酶；包涵体；多克隆抗体中图分类号：$511．035．3文献标识码：A文章编号：1000A．A．A,0(2010)024)232-04CloningandExpressionofRiboflavinSynthaseGeneinRiceandP

3、repara-tionofPolyclonalAntibodyagainstRiboflavinSynthaseSUNLi-jun，LIUHui—min，RENHai-ying，WUTing—quan，SONGTao，DONGHan-song(CollegeofPlantProtection，NanjingAgriculturalUniversity，KeyLaboratoryofMonitoringandManagementofCropDiseasesandPestInsects，MinistryofAgriculture，Nanjing210095，China)Abstr

4、act：Riboflavinsynthase(RS)catalyzesthecommittedstepinbiosynthesisofriboflavin，whichplaysanim—portantroleinorganisms．Here，riboflavinsynthasegeneinrice()wasclonedandexpressedinEscherichiacoliwithhigheficiency．Sincetheproductofexpressedoccurredintheformofinclusionbody．theproteinwasdissolvedwit

5、h6mol／Lguanidinehydrochloridesolutionandthenwasdialysedwith8mol／Lureasolution．Therabbitanti—OsRSpoly·clonalantibodywasprepared．Furthermore，antigen—specificimmuneresponsesweredeterminedbytheWesternblotwithOsRSproteinexpressedinE．coliandtotalproteinsfromriceleavesasantigens．Theresultswillbepo

6、tentialforstudyingcatalyticactivityandfunctionofriboflavinsynthaseinrice．Keywords：rice；riboflavinsynthase；inclusionbody；polyclonalantibody核黄素是一种多功能性的维生素，对动植物、微物上发挥的作用，对于研究植物的生长发育和应对生物的生长、抗病都有很重要的作用。核黄素胁迫反应等有重要意义。合酶(RS)是催化核黄素合成最后一步反应的关键微生物和植物自身能合成核黄素，针对该酶的酶，研究核黄素合酶的生理生化性质，并了解其在植研究也很多。细菌和酵母依赖

7、这个基因形成内源的核黄素，因此核黄素合酶在药物化学上是很重要的收稿日期：20094)618靶标，为此很多研究已经克隆了细菌和酵母的核黄基金项目：国家杰出青年科学基金(30525088)素合酶基因，并探讨了这些合酶的高级结构特征和作者简介：孙力军(1978．)，男，河北石家庄人，博士研究生，主要从事催化特性引。然而，针对植物核黄素合酶的报道植物生长与防卫信号传导研究。(Te1)13770773271；(E—很少。而且虽然一些植物中的核黄素合酶基因序列mail)hanchuansun@126．COB通讯作者