微生物的生长及其控制ppt课件.ppt

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1、第六章　微生物的生长及其控制概论生长：细胞物质不可逆地增加，体积增大的过程。（量变过程）繁殖：生命个体数量增加的过程。（质变过程）群体生长：指在一定时间和条件下细胞数量的增加；实质上包含着个体细胞生长与繁殖交替进行的过程。群体生长=个体生长+个体繁殖个体生长→个体繁殖→群体生长单个微生物细胞合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。同化作用的速度超过了异化作用个体的生长原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加如果各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，引起个体数目的增加。群体内各个个体的进一步生长群体的生长第一节测定生长繁殖的方

2、法一、测生长量：单位时间里微生物重量上的变化（一）直接法（精确的称干重法；粗放的测体积法）（二）间接法（比浊法，生理指标法）将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干（干燥温度可采用105℃、100℃或80℃）、称重。一般干重为湿重的10%～20%，而一个细菌细胞一般重约10-12～10-13g。该法适合菌液浓度较高的样品。（一）直接法（二）间接法1.比浊法：借助于分光光度计，在一定波长（450-650nm波段)下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。原理：在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度

3、越大。特点：快速、简便。浊度仪2.生理指标法测含氮量：蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。其他方法：含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、消耗底物量、产CO2、产酸、产热、粘度等，都可用于生长量的测定。二、计繁殖数：单细胞微生物细胞个体数目的检测法1.直接法：(1)计死活总菌数：显微镜下计数(2)死活菌分别计数：酵母：美蓝染色，活细胞无色，死细胞蓝色细菌：丫啶橙染色，活细胞有橙色荧光，死细胞发绿色荧光细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml2.间接法：是一种活菌计数法(1)平板菌落计数：好氧菌

4、、厌氧菌均可（实验）菌样稀释→浇注平板→倒置培养→统计菌落形成单位cfu→乘以稀释倍数→菌样含菌数用活菌指示剂TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)可使菌落在短时间内形成玫瑰红色——快速鉴定(2)厌氧菌的菌落计数法亨盖特滚管培养法和半固体深层琼脂法第二节微生物的生长规律一、微生物的个体生长和同步生长1、同步培养（synchronousculture）：即设法使群体中的所有细胞尽可能都处于同样细胞生长和分裂同期中，然后分析此群体的各种生物化学特征，从而了解单个细胞所发生的变化。2、同步生长（synchronousgrowth）：通过同步培养而使细胞群体处于

5、分裂步调一致的生长状态，称同步生长。方法：①环境条件诱导法：氯霉素抑制细菌蛋白质合成；细菌芽胞诱导发芽②机械筛选法：过滤法；离心法；膜洗脱法二、单细胞微生物的典型生长曲线1、典型生长曲线：生长曲线：定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的实验曲线。典型生长曲线：将菌种接种在液体培养基中隔一定时间取样，计算菌数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标作图，绘出一条包括延滞期、指数期、稳定期和衰亡期四个阶段的曲线。R(生长速率常数)=分裂次数(代)/单位时间（一）延滞期（lagphase）或停滞期--“万事开头难”1.特点：细胞数目不增加(R=0)细胞长、大

6、细胞内RNA尤其是rRNA含量增高合成代谢旺盛，诱导酶迅速合成对不良条件敏感2.影响延滞期长短的因素菌种接种龄：即“种子”的群体生长年龄，即处在生长曲线上的哪一个阶段。接种量：接种量的大小明显影响延滞期的长短。培养基成分：接种到营养丰富的天然培养基中的微生物，要比接种到营养单调的组分培养基中的延滞期短。种子损伤度3.产生原因①接种后，新的培养基与原来的培养基成分不同，细胞需要时间合成新的酶来利用新的营养物质；②接种后，细胞内的一些关键小分子、离子或酶由于稀释作用导致浓度下降，恢复到原来水平需要时间；③种子较老，缺乏ATP，必需的辅助因子及核糖体；④细胞可

7、能受损伤而需要一段时间恢复。（二）指数期（exponentialphase）或对数期1.特点：生长速率常数最大，繁殖数>死亡数细胞每分裂一次所需的时间——代时（generationtime，G，增代时间）或原生质增加一倍所需的倍增时间（doublingtime）最短。细胞平衡生长，成分均匀酶系活跃，代谢旺盛。2.三个重要参数一些细菌的代时菌名培养基培养温度代时E.coli（大肠杆菌）肉汤37℃17minE.coli牛奶3712.5Enterobacteraerogenes（产气肠细菌）肉汤或牛奶3716~18E.aerogenes组合3729~44B.C

8、ereus（蜡状芽孢杆菌）肉汤3018B.thermophilus（嗜热芽孢杆菌