课题3 血红蛋白的提取和分离ppt课件.ppt

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1、新课导入下面请看一条新闻艾滋病研究进展英国《自然》杂志登论文说，“ＴＲＩＭ５”蛋白质可有效抑制艾滋病病毒的感染。此后，世界各地的很多科学家开始研究“ＴＲＩＭ５”蛋白质的结构，但到目前为止尚未有人宣称取得突破性进展。提问研究“TRIM5”蛋白质的第一步是什么？分离和提纯TRIM5蛋白质。回答根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附的性质、对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。如何分离和提纯蛋白质？课题3血红蛋白的提取和分离专题五DNA和蛋白质技术教学目标知识目标1.了解色谱法、电泳法等分离生物大分

2、子的基本原理。2.掌握蛋白质提取的基本概念。能力目标1.学习对血液中蛋白质提取和分离的方法。2.掌握从复杂提取中提取生物大分子的基本过程和方法。过程与方法情感态度与价值观本实验采取实验与课本相结合的方法，在实验中掌握分离大分子物质的基本方法。1.发挥学生主观能动性。2.激发学生学习兴趣，培养学会僧创新能力。教学重难点课题重点凝胶色谱法的原理和方法。课题难点1.样品的预处理。2.色谱柱填料的处理。3.色谱柱的装填。内容解析概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓

3、冲溶液。缓冲溶液基础知识思考：说出说出几种常见的缓冲对NaH2PO4/Na2HPO4H2CO3/NaHCO3缓冲溶液由共轭酸碱对组成。这一共轭酸碱通常称为缓冲对、缓冲剂或缓冲系。常见的缓冲对主要有三种类型。弱酸及其对应的盐：弱碱及其对应的盐：多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐:H2CO3→NaHCO3；CH3COOH→CH3COONaNH3•H2O→NH4CL;NH4OH→NH4CLNaHCO3→Na2CO3；NaH2PO4→Na2HPO4缓冲溶液通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。

4、缓冲溶液的配制利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察和科学研究。凝胶色谱法什么是凝胶？凝胶是一些多糖类构成的内含许多贯穿的通道的微小多孔的球体。凝胶色谱法的原理相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，在凝胶的外部移动，路程较长，移动速度较慢。相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。电泳带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。琼脂糖凝胶电泳概念分类聚丙稀酰胺凝胶电泳视频：电泳的原理试验设计实验材料动物血液缓冲溶液凝胶色谱柱电泳装置离心机化学试剂1.样品处理血液的组

5、成实验操作1.1红细胞的洗涤：离心将血液分层用胶头吸管吸出黄色血浆用生理盐水洗涤。洗涤前洗涤后1.3分离血红蛋白溶液：离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。1.2血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放。1.4透析：装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。2.凝胶色谱操作2.1凝胶色谱柱的制作取胶皮盖打孔安装玻璃管安装尼龙网安装100目尼龙纱组装完成！2.2凝胶色谱柱的装填材料：交联葡聚糖凝胶（G-75）A、固定：将色谱柱装置固定在支架上B、装填：将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内装填方法：C、洗涤

6、平衡：装填完毕后，用磷酸缓冲液缓冲液充分洗涤平衡12小时2.3样品的加样和洗脱A、调节缓冲液面B、滴加透析样品C、样品渗入凝胶床D、洗脱E、收集待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5ml收集一试管，连续收集。实验结果1.样品的处理血液离心后分层实验结果与分析成功！1.洗涤次数过少，未能除去血浆蛋白。2.离心速度过高和时间过长，白细胞和淋巴细胞一同沉淀。失败原因：2.凝胶色谱柱装填加入有色物质，观察色带移动情况。方法：血红蛋白色带狭窄、均匀、平整血红蛋白色带歪曲、散乱、变宽相关链接为什么有的血管是蓝色的？携氧的血是鲜红色的，当你被

7、划伤时，你看到的是鲜红的携氧血。不携氧的血是深紫色的，当你献血时，血被抽到没有氧气的试管里，你看到的血是深紫色的。深紫色的无氧血流经我们的静脉时却呈蓝色为什么不同的光线透过皮肤的方式不同：蓝光在皮肤表面被反射回来；红光透射得比较深；静脉中深色的血吸收大部分红光。所以我们看到的是皮肤表面反射的蓝光。另外一些生物，如蛇类和蟹类，用铜来运输氧气，所以他们有真正的蓝血。课堂小结缓冲溶液：在一定的范围内，能够抵制外加少量强酸或强碱，使原来溶液PH值基本保持不变的混合溶液。凝胶色谱法：根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用

8、，来进行分离的方法。带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。电泳：实验过程1.样品处理红细胞的洗涤血红蛋白的释放分离血红蛋白溶液透析2.凝胶色谱操作凝胶色