乙肝病毒感染对细胞基本自噬的影响.docx

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1、ResearchPaper研究报告微生物学报ActaMicrobiologicaSinica50(12):1651－1656;4December2010ISSN0001－6209;CN11－1995/Qhttp://journals.im.ac.cn/actamicrocn乙肝病毒感染对细胞基本自噬的影响王娟1，2，时迎娣1，2，杨怀义1*(1中国科学院微生物研究所，病原微生物与免疫学院重点实验室，北京100101)(2中国科学院研究生院，北京100039)摘要:【目的】慢性乙肝病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染在肝硬化和肝癌的发生过程中起着重要

2、的作用，通过研究HBV感染对细胞基本自噬的影响，为HBV感染诱发肝癌以及HBV的免疫逃逸机理研究提供新的思路。【方法】本研究利用乙肝病毒表达质粒瞬时或稳定转染不同肝细胞，通过计数绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)聚集数目检测自噬小体形成，westernblot检测LC3(microtubule-associatedproteinlightchain3，微管相关蛋白质轻链3)脂酰化和p62的降解，通过构建HBVB型和C型X蛋白(HBx)的表达质粒并瞬时转染肝癌细胞和正常肝细胞，对不同基因型X蛋白对细胞自噬的影响进行了分析。【结果

3、】乙肝病毒感染后促进了LC3的脂酰化和p62的降解，增加了自噬小体的形成，增强了细胞的基本自噬。进一步研究发现，HBV感染增强的细胞基本自噬水平由HBx所引发，且C型HBx比B型对细胞基本自噬的增加更加显著。【结论】HBV通过HBx增强细胞的基本自噬，且不同基因型HBx对细胞基本自噬的增强程度不同，为进一步阐明HBV感染机理奠定了基础。关键词:乙肝病毒;细胞自噬;X蛋白中图分类号:S852文献标识码:A文章编号:0001-6209(2010)12-1651-06乙肝病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染引起的乙型肝炎严重影响着我国人口健康［1］。由于

4、该病毒为“非溶细胞”性病毒，且病毒感染后不能诱导干扰素的产生，故HBV感染后常易造成对宿主细胞的免疫逃逸而建立起病毒的慢性感染。HBV慢性感染不仅难以治愈，造成患者病情的反复发作，且与其肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)的发生密切相关［2－4］。HBV属嗜肝DNA病毒科(Hepadnav-iridae)，其基因组大小为3.2kb，编码有4种病毒蛋白［5］。其中X基因编码的X蛋白(HBx)具有多种不同的功能，其在病毒复制、细胞转化、HBV诱发的HCC发生过程中都起着十分重要的作用［6－9］。细胞自噬(Autophagy)是真核细胞用

5、于清除胞内聚集物、损伤细胞器而维持其稳态平衡的一种蛋白质降解途径［10］。近年来研究发现，细胞自噬不仅在细胞生长发育、成熟分化等过程中起着重要的作用，且与多种疾病发生、病毒感染与免疫等密切相关［11-15］。最近研究发现，HBx能通过上调Beclin1的表达，增强饥饿诱导下细胞自噬的发生［16］。那么，HBV感染是否可以通过HBx的作用，增强细胞基本自噬的发生，从而促进病毒的复制循环呢?为此，我们利用HBV基因组和HBx基因分别转染Huh7细胞、HepG2细胞、人张氏肝细胞(Changlivercell)，研究了其对转染细胞的本底水平细胞自噬的影响。结果发现，

6、HBV感染可增强细胞基本自噬的发生。同时，我们研究还发现，不同基因型HBx对本底水平细胞自噬诱导的效应存在着一定的差异，这为进一步阐明HBx对HBV复制循环，基金项目:国家自然科学基金(30770086，31070149)*通信作者。Tel:+86-10-64807476;Fax:+86-10-64807381;E-mail:yanghy@im.ac.cn作者简介:王娟(1984－)，女，河南省郑州市人，硕士研究生，从事分子病毒学研究。E-mail:wintersweet1984@126.com收稿日期:2010-05-06;修回日期:2010-05-20165

7、2JuanWangetal./ActaMicrobiologicaSinica(2010)50(12)尤其是HBV引起的肝细胞癌的发生提供了一定的依据。1材料和方法1.1材料1.1.1质粒、菌株、细胞:pHBV1.3质粒，pET-21a-bx质粒、pET-21a-cx质粒、GFP-LC3质粒为本实验室保存;大肠杆菌(Escherichiacoli)JM109为本实验室保存菌株;pMD18-T购自TaKaRa公司;pFLAG-CMVTM-2购自Sigma公司;HepG2细胞、HepG2.2.15细胞、Huh7细胞为本实验室保存细胞;人张氏肝细胞(Changlive

8、rcell)购自中国科学