维生素E的含量检验方法.doc

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1、维生素E的含量检验方法一、目的：建立维生素E含量标准检验方法，保证分析结果的准确性。二、依据：GB/T5009.82-2003三、范围：本规程适用于本公司维生素E含量检验操作四、职责：质量检验员对本标准的实施负责五、正文：1、试制和溶液1.1无水乙醚：:不含有过氧化物。1.1.1过氧化物检查方法:用5mL乙醚加1mL10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉溶液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。1.1.2去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放人纯铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。1.2

2、无水乙醇：不得含有醛类物质1.2.1检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加人少量乙醇，摇匀，再加人氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。1.2.2脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾人1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天(不时摇动，促进反应)，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。1.3无水硫酸钠。1.4甲醇：重蒸后使用。1.5重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。1.6抗坏血酸溶液(100g/L)：临用前配制。1.7氢氧化钾溶液(1+1)

3、,1.8氢氧化钠溶液(100g/1)。1.9硝酸银溶液((50g/L)o1.10银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液(3.9)中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加氢氧化钠溶液(3.8)数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。1.11维生素E标准液：a一生育酚(纯度95%)>Y一生育酚(950o),S一生育酚(纯度95%)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1mL相当于1mg。临用前用紫外分光光度计分别标定此三种维生素E溶液的准确浓度。1.12内标溶液：称取苯并「e」芘(纯度98%)，用脱醛乙醇配制成每1mL相当10ug苯并「e」芘的内

4、标溶液。1.13pHl-14试纸。2仪器与设备2.1实验室常用仪器。2.2高效液相色谱仪带紫外分光检测器。2.3旋转蒸发器2.4高速离心机。。2.5高纯氮气。2.6恒温水浴锅。2.7紫外分光光度计。3分析步骤3.1试样处理3.1.1皂化：准确称取1g~10g试样(维生素E各异构体约为40ug)于皂化瓶中，加30mL无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加5mL10%抗坏血酸，苯并[el芘标准液2.00mL，混匀。10mL氢氧化钾((1+1)1混匀。于沸水浴回流30min使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。3.1.2提取：将皂化后的试样移

5、入分液漏斗中，用50mL水分2次~3次洗皂化瓶，洗液并人分液漏斗中用约100mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并人分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤人分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。3.1.3洗涤：用约50mL水洗分液漏斗中的乙醚层，用pH试纸检验直至水层不显碱性(最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加)。3.1.4浓缩：将乙醚提取液经过无水硫酸钠(约5g)滤人与旋转蒸发器配套的250ml一300mL球形蒸发瓶内，用约100mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于5

6、5℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约2ml乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚立即加人2.00mL乙醇，充分混合，溶解提取物。3.1.5将乙醇液移入一小塑料离心管中((4.4.1)离心5min(5000r/min)。上清液供色谱分析如果试样中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，再用乙醇重新定容。并记下体积比。3.2标准曲线的制备3.2.1维生素E标准浓度的标定取各维生素E标准液若干微升，分别稀释至3.00mL乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如表1所示。标准加入标准液的量V/uL

7、比吸光系数E1%波长λ/nmα-生育酚γ-生育酚δ-生育酚100.0100.0100.07192.891.2294298298浓度计算按式（1）3.00V×10-31100AEC1=××式中：C1—维生素浓度，单位为克每毫升(g/mL);A—维生素的平均紫外吸光值;V—加人标准液的量，单位为微升(PI);E—某种维生素1%比吸光系数;3.00V×10-3—标准液稀释倍数3.2.2标准曲线的制备本标准采用内标法定量，把一定量的a—生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚及内标苯并〔e」芘液混合均匀。选择合适灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程7000，为高

8、浓度点。高浓度的1/2为低浓度点(其内标苯并「el花的浓度值不变)，用此种浓度的混合标准进行色谱分析，维生素标准曲线绘制是以维生素峰面积与内标物峰面积