资源描述：
《分子克隆溶液配方.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、分子生物学常用溶液配方：Ø抗生素储备液浓度储存温度工作浓度工作浓度(严紧型质粒)(松弛型质粒)氨苄青霉素500mg/ml（溶于水）-20℃20μg/ml60μg/ml氯霉素34mg/ml（溶于乙醇）-20℃25μg/ml170μg/ml卡那霉素10mg/ml（溶于水）-20℃10μg/ml50μg/ml链霉素10mg/ml（溶于水）-20℃10μg/ml50μg/ml四环素5mg/ml（溶于水）-20℃10μg/ml50μg/mlØBCIP0.5g5-溴-4氯-3-吲哚磷酸二氢钠(BCIP)加到10ml100%二甲基甲酰胺中,
2、4℃保存ØNBT0.5g氯化氮蓝四唑加4ml70%二甲基甲酰胺中,保存于4℃中Ø0.5mol/LEDTA(pH8.0)800ml水中加186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na.H2O),剧烈搅拌,NaOH调pH至8.0(约需20g),定容至1L,份装高压灭菌备用.Ø10mg/mlEB(溴化乙锭)100ml水中加入1g溴化乙锭,搅拌数小时,铝箔包裹或转移到棕色瓶中室温保存ØIPTGIPTG为异丙基硫代-β-D半乳糖苷(分子量为238.3D),8ml蒸馏水溶解2gIPTG后定容至10ml,用22μm滤器过滤除菌,分装成1m
3、l,-20℃储存.Ø10mml/LPMSF(苯甲基磺酰氟)用异丙醇溶解PNSF成1.74mg/ml(10mml/L)分装成小份储存ØPBS(磷酸缓冲盐溶液)800ml蒸馏水溶8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4，HCl调pH至8.0,加水定容至1L,高压灭菌20分钟,室温保存ØI液50mM葡萄糖(无菌过滤后使用)25mMTris.Cl(pH8.0)10mMEDTA(pH8.0)高压灭菌后存于4℃。ØII液0.2MNaOH0.1%SDSØⅢ液(乙酸钾溶液)60ml5mol/L乙酸钾溶液中
4、加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水Ø10%SDS(十二烷基硫酸钠)900ml水中加入100g电泳级SDS,加热至68℃.加入几滴浓盐酸调pH至7.2,定容1L,分装备用Ø1MTris800ml水溶121.1gTris碱,加入浓HCl调pH至所需值pHHCl7.470ml7.660ml8.042ml室温时调pH定容至1L,分装后灭菌ØX-galX-gal为5-溴-4氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷,用二甲基酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的储备液.保存于玻璃管或聚丙烯管中,铝箔包裹-20℃保存Ø溶菌酶用水配制成50mg/m
5、l,分装成小份,-20℃保存,一经使用后便丢弃Ø蛋白酶K储存液:20mg/ml(溶于水);保存:-20℃;反应浓度:50μg/ml;反应缓冲液:0.01mol/LTris(pH8.0),5mmol/LEDTA,0.5%SDS;反应温度:37-56℃ØRNA酶将胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/LTris.Cl(pH7.5)、15mmol/LNaCl中，配成10mg/ml，于100℃加热15分钟，缓慢冷却至室温，分装成小份，保存于-20℃。ØSTE(亦称TEN)0.1mol/LNaCl;10mmol/LTris.Cl(p
6、H8.0);1mmol/LEDTA(pH8.0)。ØTEpH7.410mmol/LTris.Cl(pH7.4)1mmol/LEDTA(pH8.0)pH7.610mmol/LTris.Cl(pH7.6)1mmol/LEDTA(pH8.0)pH8.010mmol/LTris.Cl(pH8.0)1mmol/LEDTA(pH8.0)ØTNT(WB专用)50mmol/LTris.Cl(pH7.5)150mmol/LNaCl0.05%Tween20Ø碱性磷酸酶缓冲液100mmol/LNaCl5mMMgCl2100mmol/LTris.Cl
7、(pH9.5)Ø2XSDS蛋白凝胶加样缓冲液100mmol/LTris.Cl(pH6.8)200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)4%SDS(电泳级)0.2%溴酚蓝20%甘油ØTris-甘氨酸使用液:1X:25mmol/LTris浓储备液(每升):5X:15.1gTris碱250mmol/L甘氨酸94g甘氨酸(电泳级)(pH8.0)0.1%SDS50ml10%SDS(电泳级)Ø6XDNALoadingbuffer25%溴酚蓝40%(W/V)蔗糖水溶液4℃储存Ø脱脂奶封闭液5%脱脂奶粉0.02%叠氮钠Ø转移缓冲液配制1L转移缓冲液
8、，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37gSDS,并加入200ml甲醇，加水至总量为1L。Ø细胞及细菌裂解缓冲液50mmol/LTris.Cl(pH8.0)1mmol/LEDTA(pH8.0)100mmol/LNaClØ水丙烯酰胺Tris.Cl10%SDS10%过
