酚-氯仿法提取人外周血DNA.doc

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1、酚-氯仿法提取人外周血DNA第一天1、取600μLEDTA抗凝血于2ml离心管中，加1.4ml去离子水后颠倒混匀2、4℃，10000g离心10分钟，弃上清3、加2ml去离子水，充分洗涤并振荡至肉眼看不见大块沉淀4、4℃，10000g离心10分钟，弃上清5、加350μL消化液（蛋白酶K终浓度为1mg/ml），55℃水浴过夜消化第二天1，向消化好的溶液中加入等体积（350μL）的Tris-平衡酚，上下颠倒混匀3分钟2，4℃，12000g离心10分钟，用200μL粗口枪头小心吸取上清（约350μL）至新的2ml离心管3，加350μL酚

2、和350μL氯仿，上下颠倒混匀3分钟4，4℃，12000g离心10分钟，吸上清至新的2ml离心管5，重复步骤3一次6，4℃，12000g离心10分钟，吸上清至新的2ml离心管7，加40μL3M醋酸钠和1.5ml-20℃预冷的无水乙醇，轻柔上下颠倒混匀后可见白色絮状DNA沉淀析出8，4℃，12000g离心10分钟后弃上清，加1ml-20℃预冷的75%乙醇漂洗沉淀9，小心弃上清（不要倒掉沉淀）后瞬时离心，吸弃残留液体，室温晾干3-5min10,加100μL去离子水或1×TE溶解DNA，4℃保存，若长期不用则-20℃保存